Question

10．如圖所示是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖．

請(qǐng)據(jù)圖回答：
（1）制備“工程菌”的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟，其中的核心步驟是構(gòu)建重組DNA分子．
（2）若A為未知的目的基因，獲得A常用的方法是建立（一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的）基因文庫(kù)．
（3）A、B形成C的過(guò)程中，需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶．為了利于C進(jìn)入D，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）處理D．
（4）制備所得的“工程菌”用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，操作過(guò)程中要用蛋白胨和酵母提取物來(lái)配制該培養(yǎng)基，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的滲透壓；培養(yǎng)基使用前必須用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌處理．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖，其中A為目的基因，B為運(yùn)載體（質(zhì)粒），C為重組質(zhì)粒，D為受體細(xì)胞．

解答 解：（1）基因工程的操作步驟包括：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建（構(gòu)建重組DNA分子）是基因工程的核心步驟．
（2）若A為未知的目的基因，獲得A常用的方法是建立（一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的）基因文庫(kù)．
（3）目的基因、質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒的過(guò)程中，需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶．為了利于重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞，并且受體細(xì)胞為微生物，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）處理D，使D處于感受態(tài)．
（4）制備所得的“工程菌”用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，操作過(guò)程中要用蛋白胨和酵母提取物來(lái)配制該培養(yǎng)基，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的滲透壓；培養(yǎng)基使用前必須用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌處理．
故答案為：
（1）構(gòu)建重組DNA分子
（2）建立（一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的）基因文庫(kù)
（3）限制性核酸內(nèi)切酶  DNA連接酶；CaCl₂溶液（或Ca²⁺）
（4）液體培養(yǎng)基    蛋白胨  酵母提取物   氯化鈉   高壓蒸汽滅菌法

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合制備“工程菌”的示意圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．