Question

【題目】苯酚是重要的化工原料，被廣泛應(yīng)用于酚醛樹脂、煉油、焦碳、染料等的生產(chǎn)中，并成為這些工業(yè)廢水中的主要污染物。水溶液中的苯酚可被皮膚吸收而引起中毒，含酚廢水可使水中生物大量死亡。微生物作為廢水處理中活性污泥的主體，是有毒物質(zhì)分解轉(zhuǎn)化的主要執(zhí)行者�；卮鹣铝袉栴}：

（1）欲選出高效分解苯酚的菌株，應(yīng)從__________中取樣，接著在__________（填固體或液體）培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，以增大高效分解苯酚菌的濃度。對培養(yǎng)基進行滅菌處理時，應(yīng)采用__________法。

（2）某同學(xué)采用稀釋涂布平板法對高效分解苯酚的菌株進行計數(shù)，其原理是__________。

（3）在4個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為103的稀釋液0．1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的菌落數(shù)分別為：45、108、114和120，因此可得出1mL菌液中的活菌數(shù)為__________個。使用血細胞計數(shù)板計數(shù)時，為了區(qū)分活菌和死菌可采用臺盼藍染色，對活菌計數(shù)時應(yīng)選擇視野中__________的細胞進行計數(shù)。

（4）微生物對苯酚的降解是在酶的參與下完成的，該酶經(jīng)分離純化，可用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定，該方法可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子的大小，其原因是__________。

Answer 1

【答案】活性污泥??? 液體??? 高壓蒸汽滅菌??? 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌??? 1．14×106??? 不著色??? SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性SDS能與蛋白質(zhì)形成SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差別???

【解析】

1.微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。

2.微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（1）由題干中的信息微生物作為廢水處理中活性污泥中取樣，用液體培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，以增大高效分解苯酚菌的濃度，對培養(yǎng)基進行滅菌處理的方法為高壓蒸汽滅菌法。

（2）采用稀釋涂布平板法對高效分解苯酚的菌株進行計數(shù)的原理是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

（3）統(tǒng)計的4個平板中要舍棄菌落數(shù)為45的平板，因其與其他3個平板的差異太大可能是由于實驗過程中操作不當(dāng)導(dǎo)致的，其余3個平板的平均數(shù)是114，由此推出1mL菌液中的活菌數(shù)為1.14×106，為了區(qū)分活菌和死菌可采用臺盼藍染色，對活菌計數(shù)時應(yīng)選擇視野中不著色的細胞進行計數(shù)，因為不著色的菌為活菌。

（4）用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定，該方法可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子的大小的原因是：SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性：SDS能與蛋白質(zhì)形成SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差別；只有在這種情況下，才可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子質(zhì)量的大小。