Question

【題目】目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示：

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于________。

（2）pBR322分子中有單個(gè)EcoRⅠ限制酶作用位點(diǎn)，EcoRⅠ只能識(shí)別序列—G↓AATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，請(qǐng)畫(huà)出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

（3）pBR322分子中另有單個(gè)的BamHⅠ限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過(guò)DNA連接酶作用恢復(fù)________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。說(shuō)明____________。

（4）為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無(wú)ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對(duì)照無(wú)菌落的位置）。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是____________，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是________________。

Answer 1

【答案】（每空2分，共12分）（1）篩選（鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞）

（2）

（3）磷酸二酯 兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同

（4）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素 pBR322 質(zhì)粒

【解析】（1）質(zhì)粒上的抗性基因可作為標(biāo)記基因，以便于篩選和鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（2）目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，即目的基因的兩側(cè)各有—G↓AATTC—，因此目的基因的兩側(cè)被酶EcoRⅠ切割后形成的黏性末端為。

（3）DNA連接酶能連接磷酸二酯鍵，經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因能夠連接起來(lái)，成功地獲得重組質(zhì)粒，這說(shuō)明兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同。

（4）將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落，說(shuō)明圖二中的菌落能抗氨芐青霉素。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，仍能生長(zhǎng)的也能抗四環(huán)素，空圈表示在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的，說(shuō)明不能抗四環(huán)素（只能抗氨芐青霉素）。綜上分析，與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素。圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌既能抗氨芐青霉素，也能抗四環(huán)素，說(shuō)明導(dǎo)入的是pBR322 質(zhì)粒，而不是重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被切斷，不能表達(dá)，因此含重組質(zhì)粒的大腸桿菌抗氨芐青霉素）。