Question

【題目】日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻(xiàn)，獲得2008年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖。據(jù)圖回答：

（1）綠色熒光蛋白基因在該實(shí)驗(yàn)中是作為______基因。圖中過程②需要用到的工具酶有________________。

（2）限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，請寫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端：____________。

（3）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是____________。檢測豬胎兒的DNA上是否插入了GFP基因的方法是___________________。

（4）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是_________________________________。

（5）若要在體外擴(kuò)增綠色熒光蛋白基因可采用PCR技術(shù)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR過程分為三個(gè)步驟：第一步是“高溫變性”；第二步是“低溫復(fù)性”；第三步是“中溫延伸”，需要用到_______________酶，需要的原料是_______________。

（6）在培養(yǎng)重組細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和________等。

Answer 1

【答案】目的 限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）和DNA連接酶 （或—CTAG） 顯微注射技術(shù) DNA分子雜交技術(shù) 為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因 （熱穩(wěn)定）DNA聚合（或Taq） 脫氧核苷酸 動(dòng)物血清

【解析】

分析圖示：過程①表示目的基因（綠色熒光蛋白基因）的獲取，過程②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，過程③表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞；之后的過程是：借助核移植技術(shù)將含有綠色熒光蛋白基因的豬胎兒成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核與去核的卵母細(xì)胞重組，獲得重組細(xì)胞；借助早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)將重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎，進(jìn)而進(jìn)行胚胎移植，最終獲得綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬。

(1) 圖示為綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程，其中的綠色熒光蛋白基因在該實(shí)驗(yàn)中是作為目的基因。 過程②為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。

(2) 限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端是 （或—CTAG）。

(3) 過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞（將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞）時(shí)，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術(shù)。檢測豬胎兒（轉(zhuǎn)基因生物）的DNA上是否插入了GFP基因（目的基因），可采用DNA分子雜交技術(shù)。

(4) 標(biāo)記基因的作用是：鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因。

(5) 采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要以脫氧核苷酸為原料、在熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶）的催化下進(jìn)行延伸。

(6) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素和動(dòng)物血清等。