Question

農(nóng)業(yè)科技工作者在煙草中找到了一抗病基因，現(xiàn)擬采用基因工程技術(shù)將該基因轉(zhuǎn)入棉花，培育抗病棉花品系．請(qǐng)回答下列問題．
（1）要獲得該抗病基因，可采用

 

、

 

等方法．為了能把該抗病基因轉(zhuǎn)入到棉花細(xì)胞中，常用的載體是

 

．
（2）要使載體與該抗病基因連接，首先應(yīng)使用

 

進(jìn)行切割．假如載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該載體連接的抗病基因分子末端是

 

．
A、B、C、D、
（3）切割完成后，采用DNA連接酶酶將載體與該抗病基因連接，連接后得到的DNA分子稱為

 

．
（4）再將連接得到的DNA分子導(dǎo)入農(nóng)桿菌，然后用該農(nóng)桿菌去感染棉花細(xì)胞，利用植物細(xì)胞具有的

 

性進(jìn)行組織培養(yǎng)，從培養(yǎng)出的植株中篩選出抗病的棉花．
（5）該抗病基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)的產(chǎn)物是

 

．
A．淀粉    B．脂類    C．蛋白質(zhì)    D．核酸
（6）已知BarnH I與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BarnH工和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后

 

序列明顯增多．

A．-GGATCT-
-CCTAGA-
B．-AGATCC-
-TCTAGG-
C．-AGATCT-
-TCTAGA-
D．-GGATCC-
-CCTAGG-
E．-GGATCT-和-AGATCC-
-CCTAGA--TCTAGG-
（7）采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是

 

．
①將毒素蛋白注射到棉受精卵中
②將編碼毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中
③將編碼毒素蛋白的DNA序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌，用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)
④將編碼毒素蛋白的DNA序列，與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲�。虎诨�因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定．
2、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取  ②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增  ③人工合成（化學(xué)合成）．
3、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
4、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性．

解答： 解：（1）抗病基因?qū)儆谀康幕�因，獲取目的基因的方法：從細(xì)胞中直接分離獲得、化學(xué)方法人工合成等．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，即借助農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需先用限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源DNA分子．
含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA連接酶的作用下連接起來，若載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該載體連接的抗病基因分子末端是．
（3）切割完成后，需采用DNA連接酶將載體與該抗病基因連接形成重組DNA分子．
（4）再采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，即將連接得到的DNA分子導(dǎo)入農(nóng)桿菌，然后用該農(nóng)桿菌去感染棉花細(xì)胞，進(jìn)而將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；根據(jù)植物細(xì)胞全能性原理，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將受體細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因植株，最后篩選出抗病的棉花．
（5）基因表達(dá)是指轉(zhuǎn)錄、翻譯形成蛋白質(zhì)，因此該抗病基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)．
（6）根據(jù)題圖和題意可知，BamHⅠ切割后形成的黏性末端是，BgIⅡ切割后形成的黏性末端是．由于兩種限制酶切割形成的黏性末端相同，因此黏性末端的連接方式有四種：兩種自身黏性末端連接、兩種黏性末端互連；由于兩種自身連接形成的序列仍然可以被這兩種限制酶切割，而兩種黏性末端互連形成的序列這兩種限制酶無法再識(shí)別切割，因此若干循環(huán)之后這兩種序列明顯增多，即E．
（7）在基因工程中，需要將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合后才能導(dǎo)入受體細(xì)胞．對(duì)于植物而來可以將目的基因?qū)�入植物的體細(xì)胞中，然后通過組織培養(yǎng)技術(shù)獲得抗蟲棉；同時(shí)也可將目的基因?qū)�入受精卵中�?br />故答案為：
（1）從細(xì)胞中分離   化學(xué)方法人工合成   Ti質(zhì)粒
（2）限制性內(nèi)切酶（限制酶）   A
（3）重組DNA分子
（4）全能
（5）C
（6）E
（7）③④

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程、植物組織培養(yǎng)的相關(guān)內(nèi)容，要求考生掌握基因工程常用的三種工具及作用；識(shí)記基因工程的操作步驟；識(shí)記植物組織培養(yǎng)的原理及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．