Question

【題目】圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題：

（1）若圖2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科學(xué)家要將該基因通過___________（方法）注入羊的_______________中，發(fā)育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）基因工程技術(shù)中獲得目的基因后，利用PCR技術(shù)將該基因擴(kuò)增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成________________________________________

（3）圖2中的目的基因D需要同時使用MetI和PstI才能獲得，而圖1所示的質(zhì)粒沒有限制酶MetI的酶切位點(diǎn)。所以在用該質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，需要對質(zhì)粒進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)。試幫助完成構(gòu)建需要的限制酶切位點(diǎn)的過程（提供構(gòu)建需要的所有條件）：首先用______酶處理質(zhì)粒；然后用______處理質(zhì)粒，使被切開的質(zhì)粒末端鏈接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用______ 處理質(zhì)粒形成限制酶切位點(diǎn)，它可被______識別。（供選答案如下：①EcoRI ②MetI ③PstI ④DNA連接酶 ⑤DNA聚合酶）

Answer 1

【答案】 顯微注射法 受精卵 引物 1 5 4 2

【解析】試題分析：本題考查基因工程，考查對基因工程的工具、步驟的理解和識記。解答此題，應(yīng)明確限制酶、DNA連接酶、DNA聚合酶的不同功能。

（1）培育轉(zhuǎn)基因動物，應(yīng)將目的基因和質(zhì)粒連接而成的基因表達(dá)載體通過顯微注射法注入羊的受精卵中中。。

（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，需要根據(jù)目的基因的一段已知核苷酸序列合成引物。

（3）構(gòu)建含有限制酶MetI酶切位點(diǎn)的質(zhì)粒，首先用①EcoRI處理質(zhì)粒；然后用⑤DNA聚合酶處理質(zhì)粒，使被切開的質(zhì)粒末端鏈接上相應(yīng)的脫氧核苷酸；再用④DNA連接酶處理質(zhì)粒，形成限制酶②MetI酶切位點(diǎn)。