Question

【題目】某RNA病毒的核酸檢測(cè)采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，先將待測(cè)樣本處理后再將樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。請(qǐng)據(jù)此回答下列問(wèn)題：

（1）樣本RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA的原料是________________________。

（2）逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)中使用DNA聚合酶是從水生棲熱菌中分離提取，該菌分離提取的DNA聚合酶優(yōu)勢(shì)在于________________________。

（3）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，所用兩種引物的堿基序列不能互補(bǔ)原因是_____________________。

（4）如果利用綿羊個(gè)體來(lái)生產(chǎn)相關(guān)疫苗，則接受目的基因的受體細(xì)胞是綿羊的____________。為了從乳汁中獲取產(chǎn)物，應(yīng)在目的基因上游連接上____________等調(diào)控組件。

（5）如果用細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)相關(guān)疫苗，則在傳代培養(yǎng)時(shí)常用____________分散細(xì)胞，該過(guò)程中不能用胃蛋白酶代替，原因是____________________________________。

Answer 1

【答案】脫氧核苷酸 耐高溫 兩種引物若能互補(bǔ)會(huì)發(fā)生配對(duì)，從而會(huì)減弱與目的基因的結(jié)合 受精卵 乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子 胰蛋白質(zhì)酶 細(xì)胞培養(yǎng)的適宜PH為7．2-74，胃蛋白酶作用的適宜PH約為2，當(dāng)PH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性，所以用胃蛋白酶不行

【解析】

PCR技術(shù)：

1、概念：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

2、原理：DNA復(fù)制。

3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物。

4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

5、過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)。

（1）組成DNA的基本單位是四種游離的脫氧核苷酸，因此RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA的所需的原料是脫氧核苷酸。

（2）PCR技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，PCR技術(shù)中用高溫使DNA分子熱變性，因此從水生棲熱菌中分離提取的DNA聚合酶的優(yōu)勢(shì)在于耐高溫。

（3）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，引物Ⅰ和引物Ⅱ的堿基序列不能互補(bǔ)，防止兩種引物發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，從而會(huì)減弱與目的基因的結(jié)合。

（4）培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，應(yīng)該選擇受精卵作為受體細(xì)胞，因?yàn)槭芫�卵的全能性最高。若要從乳汁中獲取產(chǎn)物，應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組。

（5）胰蛋白酶或膠原蛋白酶能使細(xì)胞相互分散開(kāi)來(lái)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2-7.4，而胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性，所以不能用胃蛋白酶分散細(xì)胞。