Question

【題目】福建山區(qū)發(fā)現(xiàn)一種珍稀植物水晶蘭，全草含藥用價值很高的水晶蘭甙。某科研所將水晶蘭甙基因導入玉米中制備出能合成水晶蘭甙的玉米愈傷組織細胞，流程圖如下�；卮鹣铝袉栴}：

（1）HindⅢ和BamHⅠ等限制酶主要是從 ______中分離純化得到的，都作用于DNA特定部位的_________鍵。使用HindⅢ和BamHⅠ兩種酶切割Ti質�？煞乐骨虚_的質粒重新連接起來，原因是_________。圖中②過程需要加入_________酶。

（2）基因工程使用的運載體除質粒外，還常用_________等。若需要大量合成目的基因，可采用PCR技術進行擴增，其條件除需模板、原料外，還需__________________等。

（3）圖中生產轉基因玉米的核心步聚是_________________（填標號）。將目的基因導入玉米細胞的方法為_________，這種方法的優(yōu)點是能使目的基因隨著Ti質粒的_________插入到植物細胞的_________上，使其遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。

（4）④過程是__________________，過程⑤中可以用__________________技術進行檢測篩選。

Answer 1

【答案】 原核生物（或微生物） 磷酸二酯 兩種限制酶切割后產生不同的黏性末端 DNA連接 動植物病毒、λ噬菌體衍生物 熱穩(wěn)定DNA聚合酶、引物 ② 農桿菌轉化法 T-DNA 染色體DNA 脫分化 抗原-抗體雜交

【解析】試題分析：分析題圖，圖示是將水晶蘭甙基因導入玉米中制備出能合成水晶蘭甙的玉米愈傷組織細胞，其中①表示獲取目的基因的過程，②表示基因表達載體的構建過程，③表示將目的基因導入受體細胞甲的過程，④表示脫分化過程，⑤表示檢測玉米愈傷組織細胞是否合成水晶蘭甙，常用抗原-抗體雜交技術。

（1）HindⅢ和BamHⅠ都為限制酶，一般取自于原核生物，是基因工程的剪刀，能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；兩種限制酶切割后產生不同的黏性末端，所以可以防止切開的質粒重新連接起來；②表示基因表達載體的構建過程，需要用DNA連接酶將目的基因與質粒連接起來。

（2）基因工程常用的運載體有質粒、動植物病毒、λ噬菌體衍生物等。PCR技術擴增目的基因需要的條件有模板、原料、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶等。

（3）轉基因技術的核心步驟是②構建基因表達載體；圖示將目的基因導入玉米細胞（植物細胞）的方法是農桿菌轉化法；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上，根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上，使其遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。

（4）圖中④是脫分化過程；⑤檢測目的基因是否翻譯形成蛋白質可用抗原-抗體雜交法。