Question

10．科技工作者常常將小鼠作為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用于治療高血壓藥物的篩選．
（1）若與高血壓有關(guān)的基因是由mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段，則需在其上游添加啟動(dòng)子，質(zhì)粒作為運(yùn)栽體．
（2）為了獲得更多的卵母細(xì)胞，需用促性腺激素對(duì)雌鼠進(jìn)行處理．從輸卵管中采集的卵母細(xì)胞，在體外可與經(jīng)過獲能處理的精子完成受精作用．
（3）在體外培養(yǎng)受精卵時(shí)，培養(yǎng)液中除了給予一定量的O₂以維持細(xì)胞呼吸外，還需要提供CO₂氣體以維持培養(yǎng)液的pH．胚胎移植時(shí)如需獲得胚胎干細(xì)胞，可從培養(yǎng)至囊胚期的早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離．
（4）子代大鼠中如果檢測(cè)到相應(yīng)蛋白質(zhì)和出現(xiàn)高血壓，即可在分子水平和個(gè)體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達(dá)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）

解答 解：（1）由mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段不含啟動(dòng)子，因此以其為運(yùn)載體時(shí)需在其上游添加啟動(dòng)子；基因工程中，質(zhì)粒作為運(yùn)栽體．
（2）用促性腺激素處理母畜可促使其超數(shù)排卵；從輸卵管中采集的卵母細(xì)胞已經(jīng)成熟，在體外可與經(jīng)過獲能處理的精子完成受精作用．
（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要提供CO₂氣體以維持培養(yǎng)液的pH．胚胎干細(xì)胞可以來自早期胚胎（囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）．
（4）子代大鼠中如果檢測(cè)到相應(yīng)蛋白質(zhì)和出現(xiàn)高血壓，即可在分子水平和個(gè)體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達(dá)．
故答案為：
（1）啟動(dòng)子   運(yùn)載體
（2）促性腺    獲能
（3）pH  內(nèi)細(xì)胞團(tuán)
（4）檢測(cè)到相應(yīng)蛋白質(zhì)和出現(xiàn)高血壓

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件；識(shí)記胚胎干細(xì)胞的來源等知識(shí)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．