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【題目】如圖為構建某重組質粒的過程示意圖.lacZ 基因可使細菌利用加入培養(yǎng)基的物質 X﹣gal,從而使菌落顯現出藍色,若無該基因,菌落則成白色.圖中甲﹣﹣戊 DNA 片段只注 明了黏性末端處的堿基種類,其它堿基的種類未作注明.

(1)若酶 M 特異性識別的 DNA 堿基序列是,則酶 N 特異性識別的 DNA 堿基序列是______________________。

(2)過程②是將所有片段混合在一起,用___________酶拼接可得到不同的重組 DNA.

(3)如果只考慮 2 個片段的組合,那么甲、乙、丁三個片段中能夠形成環(huán)狀 DNA 的片段組合 是_____。

A.甲和乙 B.甲和甲 C.甲和丁 D.乙和乙 E.乙和丁 F.丁和丁

(4)為了篩選含重組質粒的受體菌,應在培養(yǎng)基中額外加入______________培養(yǎng) 一段時間,挑選出___________色的菌落進一步培養(yǎng).原來質粒中,限制酶 M 和 N 的酶切位點 應該位于___________。

A.M 位于青霉素抗性基因中,N 位于 lacZ 基因中

B.N 位于青霉素抗性基因中,M 位于 lacZ 基因中

C.M 和 N 都位于青霉素抗性基因中

D.M 和 N 都位于 lacZ 基因中

(5)上述目的基因能夠在受體細菌中表達,其原因是不同生物______________________

【答案】 DNA連接酶 ABCDEF 青霉素和X-gal D 共用一套遺傳密碼

【解析】

1、切割DNA的工具是限制性核酸內切酶,又稱限制酶,限制酶是基因工程必需的工具酶,其特性是一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列。

2、DNA連接酶可以恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵,使兩個DNA分子片段連接成一個DNA。常用的DNA連接酶有:E·coli DNA連接酶:來源于大腸桿菌,連接黏性末端;T4DNA連接酶:來源于T4噬菌體,連接黏性末端和平末端(效率較低)。

(1)質粒經過酶M和酶N的切割形成甲、乙片段,根據甲、乙片段的黏性末端可知,兩種限制酶的識別序列分布是、,酶M特異性識別的DNA堿基序列是,則酶N特異性識別的DNA堿基序列是。由以上分析可知,酶N特異性識別的DNA堿基序列是。

(2)DNA連接酶可以將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來.
(3)甲、乙、丁都有兩個黏性末端,且都相同,因此如果只考慮2個片段的組合,那么甲、乙、丁三個片段中任意兩個連接都能夠連接形成環(huán)狀DNA。

(4)根據題干信息,“lacZ 基因可使細菌利用加入培養(yǎng)基的物質 X﹣gal,從而使菌落顯現出藍色,若無該基因,菌落則成白色,這表明青霉素抗性基因沒有被破壞”可知:為了篩選含重組質粒的受體菌,應在通用培養(yǎng)基中額外加入青霉素和X-gal,培養(yǎng)一段時間,挑選出白色的菌落進一步培養(yǎng)。lacZ基因已經被破壞,因此在原來質粒中,限制酶M和N的酶切位點都位于lacZ基因中。

(5)目的基因能夠在受體細菌中表達,原因是不同生物共用一套密碼子。

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