Question

【題目】某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用_______和________兩種限制酶對(duì)_______進(jìn)行切割，然后進(jìn)行連接，以保證重組DNA序列的唯一性。

（2）為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加__________，理由是_____________。

（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用_____技術(shù)，即通過(guò)_____和________兩個(gè)主要過(guò)程最終形成完整植株。

Answer 1

【答案】 SalⅠ Hind Ⅲ 質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA 氨芐青霉素 重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞 植物組織培養(yǎng) 脫分化 再分化

【解析】試題分析：識(shí)記和理解基因工程的基本工具及基因工程的基本操作步驟的相關(guān)知識(shí)，并形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)，在此基礎(chǔ)上，通過(guò)提取圖中“三種限制酶的位置等信息”并結(jié)合題意進(jìn)行相關(guān)試題的解答。

(1)題圖顯示：SalⅠ、BamHⅠ和HindⅢ這三種限制酶的酶切位點(diǎn)都位于質(zhì)粒中的抗四環(huán)素基因上，用其中任何一種酶切割都會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因；SalⅠ和HindⅢ的酶切位點(diǎn)分別位于目的基因（抗鹽基因）的兩端，而B(niǎo)amHⅠ的酶切位點(diǎn)位于目的基因中，若用BamHI酶進(jìn)行酶切，會(huì)破壞目的基因的結(jié)構(gòu)，最終得不到轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草。綜上分析，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用選用SalⅠ和HindⅢ對(duì)質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割。

(2) SalⅠ和HindⅢ的酶切位點(diǎn)在抗四環(huán)素基因中，所構(gòu)建的重組質(zhì)粒中含有的抗氨芐青霉素基因結(jié)構(gòu)完好，而抗四環(huán)素基因被破壞，所以為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素。

(3) 采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，主要經(jīng)過(guò)脫分化和再分化形成完整植株。