Question

【題目】金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬?gòu)U水的凈化處理。PCR擴(kuò)增過程示意圖如下，引物1和引物2分別與MT基因兩端的序列互補(bǔ)。下列表述正確的是（ ）

A.引物1和引物2的序列相同，且序列已知

B.步驟1需要解旋酶，步驟2需要耐高溫的DNA聚合酶，步驟3需要DNA連接酶

C.第三輪循環(huán)后，可擴(kuò)增出2個(gè)所需要的目的基因分子

D.為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，可在引物中設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)南拗菩院怂醿?nèi)切酶位點(diǎn)

Answer 1

【答案】CD

【解析】

PCR技術(shù)：

1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

2、原理：DNA復(fù)制。

3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物。

4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。

A、引物1和引物2的序列互補(bǔ)配對(duì)，A錯(cuò)誤；

B、步驟1高溫變性，不需要解旋酶，B錯(cuò)誤；

C、第一輪循環(huán)后沒有得到目的基因，第二輪循環(huán)后得到兩條目的基因的模板鏈，第三輪循環(huán)后便可得到2個(gè)目的基因，C正確；

D、構(gòu)建重組質(zhì)粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，所以位于目的基因兩端的引物中需要增加適當(dāng)?shù)南拗菩院怂醿?nèi)切酶位點(diǎn)，D正確。

故選CD。