Question

【題目】為探究SHH基因與角化囊腫發(fā)生的相關(guān)性，科研人員利用SHH基因的非模板鏈轉(zhuǎn)錄合成的RNA作為探針，進(jìn)行分子雜交實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)SHH基因在角化囊腫中的表達(dá)情況。其基本流程如下圖：(ampr表示氨芐青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表達(dá))

請(qǐng)回答：

(1)重組載體中SHH基因轉(zhuǎn)錄合成RNA探針時(shí)，________(填“需要”或“不需要”)啟動(dòng)子。

(2)步驟②中，用Ca2＋處理大腸桿菌，使之成為______細(xì)胞，然后導(dǎo)入重組載體。實(shí)驗(yàn)中，用添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，未導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌將會(huì)死亡，原因是這些細(xì)菌不含有______基因。

(3)能表達(dá)LacZ基因的大腸桿菌在含有IPTG和Xgal的培養(yǎng)基上會(huì)形成藍(lán)色菌落，易于識(shí)別。根據(jù)上述原理可以初步判斷________(填“藍(lán)色”或“白色”)菌落中的大腸桿菌為重組菌。

(4)將制備的探針加入角化囊腫切片中，探針將與____________________形成雜交帶，進(jìn)而判斷SHH基因的轉(zhuǎn)錄情況。

Answer 1

【答案】 需要 感受態(tài) Amp(或氨芐青霉素抗性或抗性） 白色 SHH轉(zhuǎn)錄的mRNA (只寫mRNA不對(duì)）

【解析】試題分析：圖示是檢測(cè)SHHH基因在角化囊腫中表達(dá)情況的流程，其中①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要限制酶和DNA連接酶；②是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過(guò)程；③表示用含有氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；④表示用探針進(jìn)行檢測(cè)。

（1）由圖可知，SHH基因插入在LacZ基因中，LacZ基因被SHH基因插入后不表達(dá)，所以要使SHH基因表達(dá)就需要啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別結(jié)合的位置，RNA聚合酶結(jié)合到啟動(dòng)子才能轉(zhuǎn)錄。

（2）大腸桿菌細(xì)胞用Ca2+處理后就稱為感受態(tài)細(xì)胞；要在添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存，一定要含有抗氨芐青霉素基因才可以，沒(méi)有抗氨芐青霉素基因?qū)��?huì)死亡。

（3）能表達(dá)LacZ基因的大腸桿菌在含有IPTG和X－gal的培養(yǎng)基上會(huì)形成藍(lán)色菌落，重組菌中LacZ基因被SHH基因插入后不表達(dá)，含有IPTG和X－gal的培養(yǎng)基上會(huì)形成白色菌落。

（4）判斷SHH基因的轉(zhuǎn)錄情況，也就是判斷SHH基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。