Question

(6分)下圖是動物細胞工程過程中相關的技術(shù)操作過程，請據(jù)圖回答下列問題：

(1) 在操作一中，為了使細胞彼此分離，通常是先用剪刀剪碎組織，再用消化法將細胞分開，消化法用的消化酶是胰蛋白質(zhì)酶，或膠原酶。研究表明膠原蛋白酶和胰蛋白酶在消化時的機制有差異，下表為兩種酶活性的比較表。

項目	胰蛋白酶	膠原酶
消化特性	適用于消化軟組織	適用于消化纖維多的組織
用量	0.01%～0.5%	0.1～0.3 mg/ml
消化時間	0.5～2小時	1～12小時
pH	8～9	6.5～7.0
作用強度	強烈	緩和
細胞影響	時間過長時有影響	時間長時無大影響
動物血清	有抑制作用	無抑制作用
Ca2＋和Mg2＋	有抑制作用	無抑制作用

　據(jù)表中信息可知胰蛋白質(zhì)酶作用時間需限制在0.5～2小時，原因是____________________________________，為了控制胰蛋白酶的消化作用時間，常用消化臨界時向溶液中直接加入________即可使酶滅活而終止消化。操作一的原理是__________________。

(2) 動物細胞培養(yǎng)液配制好后，通常還要先抽取少許放入培養(yǎng)瓶中，置于37℃、CO₂培養(yǎng)箱中24小時后觀察，這樣做的目的是__________________________。

(3) 在動物細胞培養(yǎng)過程中通常要對細胞進行計數(shù)，計數(shù)的細胞數(shù)應為活細胞數(shù)。某同學在細胞培養(yǎng)的一次測定中，首先振蕩搖勻培養(yǎng)液并立即吸細胞懸液少數(shù)向一試管中滴入細胞懸液9滴，再滴入臺盼藍(活細胞染液)1滴，混勻。再從試管中取混合液向計數(shù)板邊緣輕輕滴1～2滴已染色的細胞懸液，使之充滿計數(shù)板和蓋玻片之間間隙，經(jīng)測定計數(shù)室每小格中活細胞數(shù)平均為3個，則原每毫升培養(yǎng)液中含有的活細胞數(shù)應為________個。

(4) 科研人員研究發(fā)現(xiàn)某一種抗原刺激機體后，在鼠體內(nèi)可發(fā)現(xiàn)有多種效應B細胞都可產(chǎn)生針對于該特定抗原的抗體，這些抗體混合在一起即為多克隆抗體。試從抗原結(jié)構(gòu)的角度分析產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因是____________________________________。

 

Answer 1

【答案】

 (1) 處理時間太長，細胞會被消化掉，時間太短，消化不充分(達不到細胞分散的目的)　動物血清或Ca^2＋和Mg^2＋　細胞的增殖

(2) 檢測培養(yǎng)液是否被污染

(3) 大于1.2×10⁷

(4) 一種抗原有多種抗原決定簇

【解析】（1）若胰蛋白酶作用時間過長，則細胞會被消化掉，若時間太短，消化不充分。由表格可知，動物血清或Ca^2＋和Mg^2＋使胰蛋白酶失活，從而終止消化。

（2）事先觀察配制好的培養(yǎng)液，目的是檢測培養(yǎng)液是否被污染。

（3）根據(jù)計算公式3/（0.1/400）＝X/（1×10³），求得X＝1.2×10⁷，由于其中加入臺盼藍染液，所以X值略偏小，即原每毫升培養(yǎng)液中含有的活細胞數(shù)應大于1.2×10⁷。

（4）由于一個抗原具有多個抗原決定簇，所以一種抗原會刺激產(chǎn)生多種效應B細胞產(chǎn)生多個抗體。