Question

【題目】肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。請回答：

（1）進行過程①時，需用相關(guān)酶切開載體以插入let-7基因，該酶破壞的化學鍵是___________。重組載體應有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，該部位稱為___________，同時，重組載體還應有___________以驅(qū)動自身復制以及___________以鑒別受體細胞是否含有目的基因。

（2）進行過程②時，當細胞生長到表面___________時，需用___________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞并進行________________后繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因影響癌基因RAS表達的機理如圖2所示。據(jù)圖分析，肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中_________含量減少引起的，作出該假設的依據(jù)是_________________________。

Answer 1

【答案】 磷酸二酯鍵 啟動子 復制原點 標記基因 相互接觸 胰蛋白（膠原蛋白） 分瓶 RAS蛋白 miRNA和RASmRNA互補配對，抑制了翻譯過程;據(jù)圖分析可知，RASmRNA和沒有翻譯功能的miRNA結(jié)合后能抑制RAS基因的翻譯，所以細胞中RAS蛋白質(zhì)的含量減少

【解析】試題分析：分析圖1：圖1表示利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌細胞的流程，其中①表示基因表達載體的構(gòu)建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細胞，使之成為單個細胞，再加細胞懸液進行細胞培養(yǎng)的過程；分析圖2：圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。

（1）過程①表示基因表達載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）對載體進行切割，以便于目的基因的插入，該酶切割的是DNA分子中的磷酸二脂鍵。重組質(zhì)粒上的啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，復制原點可以啟動質(zhì)粒的自我復制，標記基因可以鑒別受體細胞是否含有目的基因。

（2）過程②表示用胰蛋白酶處理組織細胞獲得單個細胞的過程，當細胞生長到表面相互接觸時，需用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞并進行分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）據(jù)圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達的機理是：let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。