Question

【題目】科學(xué)工作者欲培育能產(chǎn)生含鐵量較高的轉(zhuǎn)基因花生新品種，Ti質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，具體步驟如圖：

（1）完整的Ti質(zhì)粒除了圖示結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)該包括啟動子、終止子等，其中啟動子位于基因的首段，它的作用是_____________________________________________________________________。

（2）若鐵結(jié)合蛋白基因來自菜豆，獲取該目的基因需要用到的工具酶的特點是_______________________________________________________________________________________。

（3）圖中將目的基因（鐵結(jié)合蛋白基因）導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法為______________；為確定轉(zhuǎn)基因花生是否培育成功，首先應(yīng)檢測___________，這是目的基因能否在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵；其次，利用___________檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA；最后，利用抗原—抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。

（4）圖中用到的植物細(xì)胞工程技術(shù)是_______________________________，培養(yǎng)基1中經(jīng)過脫分化得到愈傷組織，培養(yǎng)基2中篩選的方法是在培養(yǎng)基中加入一定量的_________________，培養(yǎng)基3的作用是______________________________。

Answer 1

【答案】RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄 能識別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 轉(zhuǎn)基因花生的DNA上是否插入目的基因 分子雜交法 植物組織培養(yǎng) 潮霉素 誘導(dǎo)愈傷組織再分化

【解析】

據(jù)圖分析，重組Ti質(zhì)粒中鐵結(jié)合蛋白基因稱為目的基因，潮霉素抗性基因為標(biāo)記基因；將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將開花后未成熟的胚進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，脫分化形成愈傷組織，作為受體細(xì)胞，最終培育形成轉(zhuǎn)基因花生，過程中需要生長素和細(xì)胞分裂素進(jìn)行調(diào)節(jié)。

基因工程的一般操作步驟有：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測與表達(dá)。獲取目的基因的方法有三種：①從基因文庫中獲�、诶�用PCR技術(shù)擴(kuò)增③人工合成（化學(xué)合成）。

（1）啟動子位于基因的首段，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。

（2）若鐵結(jié)合蛋白基因來自菜豆，獲取該目的基因需要用到的工具酶是限制酶，限制酶能識別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。

（3）圖中將目的基因（鐵結(jié)合蛋白基因）導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；為確定轉(zhuǎn)基因花生是否培育成功，首先應(yīng)檢測轉(zhuǎn)基因花生的DNA上是否插入目的基因；其次，利用分子雜交法檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA；最后，利用抗原—抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。

（4）圖中用到的植物細(xì)胞工程技術(shù)是植物組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基1中經(jīng)過脫分化得到愈傷組織，培養(yǎng)基2中篩選的方法是在培養(yǎng)基中加入一定量的潮霉素，培養(yǎng)基3的作用是誘導(dǎo)愈傷組織再分化。