Question

20．如圖為利用人成纖維細胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進行人類基因定位的操作示意圖，請回答相關(guān)問題．

（1）圖示方法是動物細胞融合技術(shù)的應(yīng)用，該技術(shù)的基礎(chǔ)是動物細胞培養(yǎng)技術(shù)．
（2）操作所用的成纖維細胞應(yīng)傳代10代以內(nèi)，誘導(dǎo)融合時需要加入的促融劑是PEG（或滅活病毒）．
（3）人、鼠細胞先經(jīng)過細胞膜融合形成，再經(jīng)過一次多（雙）核細胞有絲分裂，形成單核細胞．
（4）HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用，培養(yǎng)時溫度應(yīng)為36.5±0.5℃，操作中加入烏本苷的目的是除去成纖維細胞．
（5）下表所示為雜交細胞A、B、C、D中存在的人類染色體及人類特有的4種酶（+表示存在，-表示不存在），這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表推斷，編碼酶Ⅰ的基因位于1染色體上，編碼酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于染色體2上．

雜交細胞	酶				人類染色體
	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	1	2	3
A	-	+	+	+	-	+	-
B	+	-	+	-	+	-	-
C	-	-	-	-	-	-	+
D	+	+	-	+	+	+	+

Answer 1

分析 1、分析題圖：圖示為利用人成纖維細胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進行人類基因定位的操作示意圖，成纖維細胞和小鼠骨髓瘤細胞在促融劑的作用下形成三種雜交細胞，即成纖維細胞自身融合細胞、小鼠骨髓瘤細胞自身融合的細胞和雜交細胞；在HAT培養(yǎng)基上篩選出成纖維細胞自身融合細胞和雜交細胞；加人鳥本苷的目的是除去成纖維細胞，留下雜交細胞．
2、分析表格：雜交細胞A中存在2號染色體，表達出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ；雜交細胞B存在1號染色體，表達出酶Ⅰ、Ⅲ；雜交C存在3號染色體，不能表達出這四種酶；雜交細胞D存在1、2和3號染色體，表達出酶表達出酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ．

解答 解：（1）由圖分析，該過程為動物細胞融合，其基礎(chǔ)是動物細胞培養(yǎng)．
（2）目前使用的正常細胞通常為10代以內(nèi)的，因為10代以內(nèi)的細胞可以保持細胞正常的二倍體核型．誘導(dǎo)兩個動物細胞融合的方法：物理（離心、振動、電刺激）、化學(xué)（PEG）、生物誘導(dǎo)（滅活的病毒）．
（3）人、鼠細胞先經(jīng)過細胞膜融合形成多核細胞，經(jīng)過一次有絲分裂，形成單核細胞．
（4）據(jù)題干信息，人成纖維細胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，而小鼠骨髓瘤細胞不能在HAT培養(yǎng)基上存活，則HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用，篩選出人成纖維細胞和成纖維細胞融合的雜交細胞；動物細胞培養(yǎng)的適宜溫度為36.5±0.5℃；由圖可知，操作中加人鳥本苷的目的是除去成纖維細胞，篩選出雜交細胞．
（5）雜交細胞B只存在1號染色體，其表達出酶Ⅰ、Ⅲ，說明編碼酶Ⅰ的基因位于1號染色體上；雜交細胞A中只存在2號染色體，但表達出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，而雜交細胞B只存在1號染色體，也能表達出酶Ⅲ，說明編碼酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于2號染色體上．
故答案為：
（1）動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)
（2）10 PEG（或滅活病毒）
（3）多（雙）核細胞有絲分裂
（4）選擇 36.5±0.5 除去成纖維細胞
（5）1Ⅱ和Ⅳ

點評 本題結(jié)合圖標(biāo)，考查動物細胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記動物細胞培養(yǎng)的過程及條件；識記動物細胞融合的手段及其應(yīng)用，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．