Question

【題目】重組酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技術(shù)使乙肝病毒相關(guān)基因在酵母菌內(nèi)表達(dá)并大規(guī)模培養(yǎng)，從而提取制成疫苗。

（1）下圖是獲取目的基因的流程：

①圖中基因組文庫 （小于/等于/大于）cDNA文庫。

②B過程需要的酶是 ；A、C過程中 （可以／不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中 和 為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過程中所用酶的顯著特點(diǎn)是 。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端，后者需用 （E·coil／T4） DNA連接酶通過催化 鍵使目的基因與質(zhì)粒連接起來。為使目的基因在酵母菌細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達(dá)載體的 和 之間。

（3）在導(dǎo)入表達(dá)載體時(shí)常用Ca+處理酵母菌，使其成為 細(xì)胞，再與表達(dá)載體于緩沖液中混合，在一定的溫度下完成轉(zhuǎn)化。

（4）為了檢測目的基因是否成功翻譯，可以用 技術(shù)，若沒有出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶，則可能需要用 做探針來檢測是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。

Answer 1

【答案】（1）①大于 ②逆轉(zhuǎn)錄酶 可以 ③DNA cDNA 耐高溫

（2）T4 磷酸二酯 啟動(dòng)子 終止子

（3）感受態(tài)

（4）抗原-抗體雜交 帶標(biāo)記的目的基因

【解析】

試題分析：（1）①基因組文庫包含某種生物所有的基因，而cDNA文庫是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達(dá)，cDNA文庫只包含某種生物部分基因，所以cDNA文庫小于基因組文庫。

②B過程是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶．根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，A、C過程可以使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增．PCR技術(shù)是在高溫條件下進(jìn)行的，該過程中所用酶要耐高溫。

（2）T4DNA連接酶能連接平末端的磷酸二酯鍵，使目的基因與質(zhì)粒連接起來．為使目的基因在酵母菌細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達(dá)載體的 啟動(dòng)子和終止子之間。

（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)，常用Ca+處理酵母菌，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，再與表達(dá)載體于緩沖液中混合，在一起的溫度下完成轉(zhuǎn)化。

（4）檢測目的基因是否整合到受體細(xì)胞的染色體上，可通過DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄形成mRN，可通過分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測．這兩種技術(shù)都需要用帶標(biāo)記的目的基因做探針．檢測目的基因是否成功翻譯，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)。