Question

【題目】【生物一選修1生物技術(shù)實(shí)踐】下面是篩選抗鏈酶素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)圖解。

實(shí)驗(yàn)步驟：

①把大量對鏈酶素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

②待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進(jìn)行培養(yǎng)。

③在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。

請回答：

（1）配制培養(yǎng)基時(shí)除了滿足基本的營養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)、_______、_________的要求。

（2）從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_________培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，則培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為_________。由圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為_________。

（3）對2和3進(jìn)行比較，在2上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個(gè)菌落接種到_________（含鏈霉素/不含鏈霉素）的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之_________（前/后）。

（4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有_________的特點(diǎn)。

Answer 1

【答案】 pH 氧氣 選擇 黑色 稀釋涂布平板法 含鏈霉素 前 頻率低/低頻性

【解析】試題分析：影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每平板上的菌落控制在50～300個(gè)）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測的突變型菌落．影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，目前已廣泛應(yīng)用于營養(yǎng)缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。

（1）配制基在提供幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

（2）鏈霉素是抗生素，對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落菌落顏色為黑色。由圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。

（3）培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有抗鏈霉素性狀的大腸桿菌，將其中一個(gè)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。

(4)抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變獲得的性狀，3號(hào)培養(yǎng)皿中的菌落比1號(hào)、2號(hào)中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。