Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關，抗HPV的單克隆抗體可以準確檢測出HPV，從而及時監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生。回答下列問題：

（1）制備抗HPV的單克隆抗體時，給小鼠注入的抗原是__________，然后從小鼠體內(nèi)獲得能產(chǎn)生相應抗體的細胞，這種細胞內(nèi)參與抗體合成和分泌的細胞器有__________。

（2）制備單克隆抗體過程中用到了小鼠的骨髓瘤細胞，這是因為該細胞具有__________的特點。B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合時，常用的誘導因素有__________等。

（3）在HAT培養(yǎng)基上能夠連續(xù)增殖的細胞是___________，該細胞所產(chǎn)生的抗體__________（填“一定”或“不一定”）能抗HPV。對HPV抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)時，先將培養(yǎng)液中的細胞濃度稀釋到3~10個/mL，然后在多孔細胞培養(yǎng)板的每個孔中只能加入0．1 mL細胞稀釋液，絕對不能多加，原因是__________。

Answer 1

【答案】HPV或HPV的蛋白質 核糖體、內(nèi)質網(wǎng)、高爾基體、線粒體 無限增殖 PEG、滅活的病毒、電激 雜交瘤細胞 不一定 使每個孔內(nèi)的細胞不多于一個，從而達到單克隆培養(yǎng)的目的

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應；

（2）得到相應的B淋巴細胞；

（3）將小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選；

（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生長（這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）；

（5）對上述雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細胞；

（6）最后，將雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）制備抗HPV的單克隆抗體時，給小鼠注入的抗原是HPV或HPV的蛋白質。小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞，抗體屬于分泌蛋白，漿細胞中參與抗體合成和分泌的細胞器有核糖體、內(nèi)質網(wǎng)、高爾基體和線粒體。

（2）小鼠骨髓瘤細胞具有無限増殖的特點。B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合時常用的誘導因素有PEG、滅活的病毒、電激等。

（3）在HAT培養(yǎng)基上能夠連續(xù)増殖的細胞是雜交瘤細胞，該細胞所產(chǎn)生的抗體不一定能抗HPV，因為從小鼠體內(nèi)獲得的能產(chǎn)生抗體的漿細胞不只是專門針對HPV的，也有可能是其他抗原刺激后產(chǎn)生的，漿細胞產(chǎn)生的抗體是否是HPV抗體，還需要進行檢測。單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原的抗體，對HPV抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)時，先將培養(yǎng)液中的細胞濃度稀釋到3～10個/mL，然后在多孔細胞培養(yǎng)板的每個孔中只能加入0.1mL細胞稀釋液，絕對不能多加，因為多于0.1mL的細胞稀釋液中就可能含2個或更多個細胞，這樣每個孔內(nèi)的細胞就不是一個，就達不到單克隆培養(yǎng)的目的。