Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．請回答下列問題：
（1）研究人員從陸地棉中獲取酶D基因，并用同樣的方法獲取轉(zhuǎn)運肽基因．依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，然后采用分別進行擴增．
（2）如圖所示，選用圖中的酶處理兩個基因后，再用DNA連接酶處理，可得到端（填圖中字母）相連的融合基因．
（3）將上述融合基因插入圖所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液．
（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（5）用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否 ．

Answer 1

【答案】
（1）基因文庫； PCR技術(shù)
（2）ClaⅠ； AD
（3）基因表達載體（或“重組質(zhì)粒”）；四環(huán)素
（4）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細�?/span>
（5）成功表達
【解析】解：（1）獲取目的基因的方法包括：①從基因文庫中獲取；②利用PCR技術(shù)擴增； ③人工合成（化學合成）．因此，可以從基因文庫中獲取酶D基因和轉(zhuǎn)運肽基因；擴增目的基因可采用PCR技術(shù)．（2）切割獲得酶D基因和轉(zhuǎn)基因肽基因時，應(yīng)該用同種限制酶，以獲得相應(yīng)的黏性末端．因此，可用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建表達載體并導入農(nóng)桿菌中．由圖可知，標記基因是四環(huán)素抗性基因，因此將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落．（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞．�?）檢測目的基因是否成功表達，應(yīng)該采用抗原﹣抗體雜交法．

所以答案是：（1）基因文庫；PCR技術(shù)（2）ClaⅠA；D（3）基因表達載體（或“重組質(zhì)�！保�；四環(huán)素（4）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞�?）成功表達

【考點精析】利用基因工程的原理及技術(shù)對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．