Question

【題目】從自然菌樣篩選較理想的生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。

（1）不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)分解纖維素的細菌樣應從____________環(huán)境采集。

（2）富集培養(yǎng)指創(chuàng)設僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，同時抑制或阻止其他微生物生長，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對纖維素分解菌的富集培養(yǎng)應選擇_______________的培養(yǎng)基，此外，在篩選纖維素的分解菌的過程中則是用____________染色法，培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的_________。

（3）對分離的菌種還要做進一步的鑒定，如在鑒定分解尿素的細菌時，需在培養(yǎng)基中加入________指示劑，若指示劑變________色，說明有目的菌株存在。

（4）從土壤中分離出分解尿素的細菌后，如需計數(shù)，在對樣品懸液進行梯度稀釋時，未經(jīng)振蕩而直接取上層懸液進行梯度稀釋，用不同稀釋倍數(shù)的樣液接種到平板上進行培養(yǎng)和計數(shù)，統(tǒng)計出的菌落數(shù)往往比正確操作統(tǒng)計出的菌落數(shù)______（填偏大、偏小或相等）。

（5）在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在____________條件下進行，通常將____________的形狀、大小、顏色等特征作為鑒定菌種的依據(jù)。

（6）制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時，應待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在 ________附近倒平板。等待平板冷卻凝固后，將平板________。

（7）DNA的鑒定中，DNA與________試劑混合經(jīng)水浴加熱呈________色。

Answer 1

【答案】富含纖維素 以纖維素為唯一碳源 剛果紅 透明圈 酚紅 紅 偏大 無菌 菌落 酒精燈火焰 倒置 二苯胺 藍色

【解析】

篩選目的菌株一般是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。常用的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。培養(yǎng)基在配制時，各種成分在溶化后分裝前必須進行pH調(diào)整，接種前要進行滅菌，保證無菌操作，培養(yǎng)微生物時，應將培養(yǎng)皿倒置。

（1）因為不同的微生物生存的環(huán)境不同，所以采集纖維素分解菌應從富含纖維素的環(huán)境中采集。

（2）篩選微生物需配制選擇培養(yǎng)基，因為纖維素分解菌能分解纖維素，故在培養(yǎng)基中加入纖維素為唯一碳源。在篩選纖維素分解菌時往往采用剛果紅染色法，因為剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復合物就無法合成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，所以我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

（3）尿素分解菌能夠產(chǎn)生脲酶使尿素分解為氨而使染液pH升高，使得酚紅指示劑顯紅色，所以可以用酚紅指示劑鑒定尿素分解菌，證明目的菌株的存在。

（4）尿素分解菌的代謝類型是異樣需氧型，尿素分解菌主要集中在培養(yǎng)液的上層，所以未經(jīng)振蕩而直接取上層懸液進行梯度稀釋，用不同稀釋倍數(shù)的樣液接種到平板上進行培養(yǎng)和計數(shù)，統(tǒng)計出的菌落數(shù)往往比正確操作統(tǒng)計出的菌落數(shù)偏大。

（5）微生物的分離和培養(yǎng)過程中，一定要注意無菌操作，防止雜菌污染，通常將菌落的形狀、大小、顏色等特征作為鑒定菌種的依據(jù)。

(6)制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基時，待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。待平板冷卻凝固約5～10min后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。

(7) 在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會變成藍色。