【題目】為生產具有特定性能的α-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656個堿基對),利用基因工程大量制備琢α-淀粉酶,實驗流程見下圖。請回答下列問題:

(1)利用PCR技術擴增α-淀粉酶基因前,需先合成兩條引物,并獲得細菌的_______________________。

(2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接,需在引物的____________________端加上限制性酶切位點,且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點,主要目的_________________________。

(3)進行擴增時,反應的溫度和時間需根據(jù)具體情況進行設定,下列選項中________的設定與引物有關,________的設定與擴增片段的長度有關。(填序號)

①加熱至90~95℃(變性)

②冷卻至55~60℃(復性)

③加熱至70~75℃(延伸)

④90~95℃維持時間

⑤55~60℃維持時間

⑥70~75℃維持時間

(4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列:

圖中虛線框內mRNA片段包含________個密碼子,如虛線框后的序列未知,預測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。

(5)獲得工程菌表達的α-淀粉酶后,為探究影響酶活性的因素,以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性,結果如下:

緩沖液

50 mmol/LNa2HPO4-KH2PO4

50 mmol/LGly-NaOH

50 mmol/LTris-HCl

pH

6.0

6.5

7.0

7.5

7.5

8.0

8.5

9.0

9.0

9.5

10.0

10.5

酶相對活性%

25.4

40.2

49.8

63.2

70.1

99.5

95.5

85.3

68.1

63.7

41.5

20.8

根據(jù)上述實驗結果,初步判斷該α-淀粉酶活性最高的條件為___________________________

【答案】基因組DNA 5’ 使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連 7 16 pH8.0,緩沖液為50 mmol/LGly-NaOH

【解析】

PCR的原理是DNA雙鏈的復制,原料是四種游離的脫氧核苷酸,需要2種引物,需要耐高溫的DNA聚合酶。PCR包括:高溫變性;降溫復性;延伸子鏈。

1)由題干信息可知,海洋生物含有α-淀粉酶基因,因此要首先獲得細菌的基因組DNA,從中提取并擴增目的基因。

2)引物可以引導子鏈的延伸,脫氧核苷酸是與引物的3’端相連的,故要在引物的5’端假說限制酶切點。常在2條引物上加入不同的限制酶切點,目的是使DNA片段能定向插入基因表達載體,防止自身相連。

3PCR擴增時,②退火的溫度與引物長短和堿基種類有關。⑥70~75℃維持時間即延伸時間長短與擴增片段的長度有關。

4)圖中含有7個密碼子:AUG、CCA、UCA、ACAAAU、ACUAAG。虛線框后密碼子的第一位堿基是G,第二位有4種可能性,第三位有4種可能性,故密碼子種類是4×4=16種。

5)由圖表可知,pH8.0,緩沖液為50 mmol/LGly-NaOH中酶活性最高,為99.5。

練習冊系列答案
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【題目】下圖是某湖泊生態(tài)系統(tǒng)能量流動的定量分析〔圖中所示數(shù)值的單位是(Jcm2a)〕為植物,G為植食,H為動物,C為肉食性動物。以下相關敘述不正確的是

A. 與該生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性密切相關的是圖中的G、HC所形成的營養(yǎng)結構

B. GH的能量傳遞效率為1351

C. 從生態(tài)學的觀點來看,G、HC所包含的所有生物構成生物群落

D. H包括多種動物,它們之間需求相似的構成競爭關系

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【題目】為研究不同濃度的納米銀對藍藻光合作用和細胞呼吸的影響,研究人員用不濃度的納米銀溶液培養(yǎng)藍藻,實驗結果如下表所示。請回答下列問題:

納米銀濃度

(mg·L-1)

光合速率

(μmolO2·m-2·s-1)

細胞呼吸速率

(μmolO2·m-2·s-1)

葉綠素a含量

(mg·g-1)

0

10

1

0.070

1

3.3

0.3

0.025

5

1.2

0.2

0.018

10

0.201

0.001

0.005

(1)由表中數(shù)據(jù)可知,納米銀對藍藻的光合作用有抑制作用,據(jù)表分析其主要原因是____________________________________________。

(2)藍藻的遺傳物質主要存在于___________,其細胞內遺傳信息的傳遞途徑是______________________(用箭頭和文字表示)。

(3)在測定納米銀對藍藻細胞呼吸的影響時,應在___________環(huán)境中進行實驗。將在5mg·L-1納米銀條件下培養(yǎng)一段時間的藍藻取出后置于不含納米銀的條件下培養(yǎng),藍藻細胞呼吸速率始終低于1molO2·m-2·s-1,根據(jù)上表推測,主要的原因是______________________。藍藻細胞消耗氧氣的場所是___________。

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(1)某實驗室有一只卷翅昆蟲和多只野生型翅昆蟲,請利用它們完成下列實驗設計,來判斷這對相對性狀的顯隱性關系。

第一步:讓該卷翅個體與異性野生型翅個體雜交得到F1,且F1出現(xiàn)兩種性狀。

第二步:再讓____________________________________________得到F2

結果與結論:若______________________,則_________________________________;若_________________________________,則_________________________________。

(2)若讓該種群中基因型如圖1所示類型的昆蟲雌雄個體相互交配,發(fā)現(xiàn)F1中卷翅︰野生型翅=3︰1,則卷翅是___________(填“顯性”或“隱性”)性狀。

(3)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)某品系昆蟲的1號染色體上基因的位置關系如圖2所示,且當后代B基因純合時胚胎期致死。該品系的親代雌雄昆蟲相互交配(不考慮交叉互換和突變),子一代再自由交配,子二代中雜合子的概率是___________;自由交配n代以后,與親代的品系相比,子代中A基因的基因頻率下降,原因是____________________________________________。

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三孢布拉霉菌→梯度稀釋→涂布到含TTC的培養(yǎng)基上→挑取單菌落→擴大培養(yǎng)→收集菌絲并處理→萃取→鑒定

(1)胡蘿卜素的提取方法有從植物中提取等等。上述流程圖中提取到胡蘿卜素后鑒定一般要用________法。胡蘿卜素能夠治療夜盲癥、干皮癥等是因為夜盲癥、干皮癥等疾病是由于缺少維生素A而引起的,而1分子的β-胡蘿卜素可被氧化分解成2分子_____________。根據(jù)胡蘿卜素的理化性質分析,為了讓胡蘿卜素更容易被人體吸收,炒胡蘿卜時要多加些________________。

(2)流程圖中將菌液涂布到含TTC的培養(yǎng)基上,目的是篩選出合成胡蘿卜素較強的菌體(高產菌株),含TTC的培養(yǎng)基屬于__________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。對照組需涂布等量的__________以判斷培養(yǎng)基是否被污染。挑取單菌落時,若菌落周圍____________,則菌株合成胡蘿卜素的能力較強。

(3)為了驗證萃取物是否是胡蘿卜素,該同學將葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、萃取物和色素混合液(含葉綠素b、葉綠素a、葉黃素和胡蘿卜素)依次點樣在濾紙的1、2、3、4、5位置(如圖甲所示,并進行分離,濾紙條上各色素帶的位置為____________(填字母)時,即可說明該萃取物最可能是胡蘿卜素。

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B.過程②過程③都有水的生成

C.物質X產生物質Y的同時也會產生大量[H]

D.過程③發(fā)生在細胞質中

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