Question

3．大腸桿菌是人和動(dòng)物腸道中普遍存在的一種兼性厭氧菌，在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)槎喾N有機(jī)酸并產(chǎn)生CO₂等氣體．某研究機(jī)構(gòu)使用“濾膜法”對受污染的河流水體進(jìn)行了大腸桿菌活菌數(shù)目的測定．請回答：
（1）研究人員向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍(lán)水溶液的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后可觀察到溶液顏色的變化為由藍(lán)變綠再變黃，并且在倒置的小管中出現(xiàn)氣泡．
（2）測定大腸桿菌活菌數(shù)目時(shí)，需制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中為細(xì)菌提供氮源的物質(zhì)是牛肉膏和蛋白胨．為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)作為指示劑．
（3）為了便于統(tǒng)計(jì)污染嚴(yán)重的水體中活菌的數(shù)目，需將水樣進(jìn)行適當(dāng)稀釋，例如取水樣1mL加入無菌水99mL制備稀釋倍數(shù)為10²的稀釋液，并照此依次制備更高倍數(shù)的稀釋液．每個(gè)稀釋倍數(shù)的菌液取10mL進(jìn)行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上．為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和旋轉(zhuǎn)濾膜等操作都應(yīng)該在酒精燈火焰附近進(jìn)行．
（4）將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔12h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果．如果經(jīng)過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為10²的4個(gè)平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48（4個(gè)平板上接種的稀釋液均為0.1mL），那么每升河水中約含大腸桿菌4.5×10⁷ 個(gè)．用這種方法測定的細(xì)菌數(shù)量比實(shí)際活菌數(shù)量要少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落．

Answer 1

分析 1、二氧化碳可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃．
2、培養(yǎng)各種微生物的培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽．
3、伊紅為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅美藍(lán)是專一鑒別大腸桿菌的指示劑．
4、常用的純化微生物時(shí)的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
5、稀釋涂布平板法能用于微生物的計(jì)數(shù)，其計(jì)算公式為：1毫升（克）樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（毫升），M代表稀釋倍數(shù)；用稀釋涂布平板法對微生物計(jì)數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落．

解答 解：（1）由題干“在無氧條件下，大腸桿菌通過發(fā)酵能將葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)槎喾N有機(jī)酸并產(chǎn)生CO₂等氣體”，向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍(lán)培養(yǎng)一段時(shí)間的大腸桿菌，可產(chǎn)生CO₂氣體，CO₂可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃，并且在倒置的小管中出現(xiàn)氣泡．
（2）用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨能為細(xì)菌提供氮源；伊紅美藍(lán)是專一鑒別大腸桿菌的指示劑，為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)作為指示劑．
（3）用稀釋涂布平板法進(jìn)行對微生物計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋10²倍，可取水樣1mL加入到99mL的無菌水中進(jìn)行稀釋；為了防止雜菌污染，整個(gè)操作過程應(yīng)進(jìn)行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉(zhuǎn)濾膜等操作時(shí)都應(yīng)該在酒精燈火焰附近進(jìn)行．
（4）統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)的菌落數(shù)目時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，如果經(jīng)過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為10²的4個(gè)平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數(shù)=（43+47+42+48）÷4=45個(gè)，每毫河水中約含大腸桿菌數(shù)=（C÷V）×M=（45÷0.1）×10²=4.5×10⁴個(gè)，每升河水中約含大腸桿菌數(shù)=4.5×10⁴×10³=4.5×10⁷個(gè)；用稀釋涂布平板法測定的細(xì)菌數(shù)量比實(shí)際活菌數(shù)量要少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落．
故答案為：
（1）由藍(lán)變綠再變黃 氣泡
（2）牛肉膏和蛋白胨 伊紅美藍(lán)
（3）99 酒精燈火焰
（4）穩(wěn)定 4.5×10⁷ 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落

點(diǎn)評 本題考查微生物的培養(yǎng)、分離和計(jì)數(shù)的知識(shí)，考生識(shí)記所列知識(shí)點(diǎn)，并能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論是解題的關(guān)鍵．