Question

【題目】科研人員利用基因工程技術(shù)獲得了耐儲(chǔ)存的轉(zhuǎn)基因番茄，其原理如下圖所示：

請回答下列問題。

（1）培育該轉(zhuǎn)基因番茄過程中，目的基因是___________，核心步驟是___________。若要迅速獲得大量目的基因，常用的技術(shù)是____________。

（2）重組質(zhì)粒導(dǎo)入番茄細(xì)胞時(shí)，可以先讓番茄細(xì)胞經(jīng)過脫分化得到愈傷組織，再把愈傷組織浸入到含有重組質(zhì)粒的___________菌液中，通過該菌的___________作用使目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞。這種方法往往需要將目的基因結(jié)合到___________上，并最終將目 的基因插入到番茄細(xì)胞的___________上。

（3）據(jù)圖分析，乙烯合成酶的反義基因與乙烯合成酶基因的異同是___________。

Answer 1

【答案】乙烯合成酶的反義基因 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 PCR 農(nóng)桿菌 轉(zhuǎn)化 Ti質(zhì)粒的了一DNA 染色體DNA 組成它們的堿基對排列順序都相同，但轉(zhuǎn)錄的模板鏈不同

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）培育該轉(zhuǎn)基因番茄過程中，目的基因是乙烯合成酶的反義基因，核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。若要迅速獲得大量目的基因，常用的技術(shù)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。
（2）重組質(zhì)粒導(dǎo)入番茄細(xì)胞時(shí)，可以先讓番茄細(xì)胞經(jīng)過脫分化得到愈傷組織，再把愈傷組織浸入到含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌液中，通過該菌的轉(zhuǎn)化作用使目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞。這種方法往往需要將目的基因結(jié)合到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，并最終將目的基因插入到番茄細(xì)胞的染色體DNA。
（3）乙烯合成酶的反義基因與乙烯合成酶基因的異同是組成它們的堿基對的種類、數(shù)量和排列順序都相同，但轉(zhuǎn)錄mRNA的模板鏈不同。