Question

【題目】利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因抗凍番茄.該過(guò)程需要用多種限制酶,下圖依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn).

請(qǐng)回答:

（1）上述限制酶在特定位點(diǎn)切割DNA,其實(shí)質(zhì)是斷開(kāi)DNA分子每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的_______切割后產(chǎn)生了____________末端.

（2）利用EcoR I 和NAE 酶切得某種魚(yú)的抗凍蛋白基因,可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質(zhì)料連接成重組質(zhì)料,原因是___________

（3）重組質(zhì)料導(dǎo)入番茄后,欲檢測(cè)抗凍蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,需利用__________作探針.

（4）利用抗凍蛋白制備出相應(yīng)的__________,然后進(jìn)行抗原-抗體雜交,觀察到雜交帶出現(xiàn),尚不足以確定轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育是否成功.因此,還應(yīng)將轉(zhuǎn)基因番茄__________,以確定其耐寒能力是否提高.

Answer 1

【答案】 磷酸二酯鍵 黏性末端和平末端 相同的黏性末端之間可連接，且不同的平末端之間也可以連接 標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段（或“標(biāo)記的抗凍蛋白基因”或“標(biāo)記的含有目的基因的DNA單鏈”） 抗體 置于寒冷環(huán)境培養(yǎng)（或進(jìn)行個(gè)體水平檢測(cè)或進(jìn)行抗凍實(shí)驗(yàn)）

【解析】注：（2）（3）錯(cuò)字“質(zhì)料”

試題分析：基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。基因工程常用的工具有工具酶和運(yùn)載體，工具酶包括限制酶和DNA連接酶，運(yùn)載體包括質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒和噬菌體衍生物。

（1）限制酶能夠識(shí)別特定的DNA脫氧核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)進(jìn)行切割，作用的化學(xué)鍵是磷酸二脂鍵。據(jù)圖分析，上述三種酶切割后分別產(chǎn)生了黏性末端、平末端、平末端。

（2）相同的黏性末端之間可連接，且不同的平末端之間也可以連接，所以利用EcoR I 和NAE 酶切得某種魚(yú)的抗凍蛋白基因，可與被EcoR I 和Sam I酶切后的質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒。

（3）檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物mRNA，可以用分子雜交法，即用標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段作為探針，與目的mRNA雜交。

（4）利用抗凍蛋白制備出相應(yīng)的抗體，然后進(jìn)行抗原-抗體雜交，觀察到雜交帶出現(xiàn)，尚不足以確定轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育是否成功。因此,還應(yīng)將轉(zhuǎn)基因番茄置于寒冷環(huán)境培養(yǎng)，以確定其耐寒能力是否提高。