Question

【題目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果膠使細胞壁破損。成熟的番茄果實中，PG合成顯著增加，能使果實變紅變軟，但不利于保鮮。利用基因工程減少PG基因的表達,可延長果實保質期�？茖W家將PG基因反向接到Ti質粒上，導入番茄細胞中，得到轉基因番茄，具體操作流程如下圖。據(jù)圖分析并回答下列問題：

（1）形成的PG反義質粒叫做_______________，它的構建過程是基因工程的核心，需要用到的工具酶有_____________。若已獲取PG的mRNA，可通過________ 獲取PG基因。

（2）重組質粒轉移到大腸桿菌中的目的是 ，要實現(xiàn)此目的，還可以用_________法。

（3）要獲取番茄的原生質體，通常要用到 酶。用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質體后，可用含有 的培養(yǎng)基進行篩選。將其置于質量分數(shù)約為0．3g/ml的蔗糖溶液中，觀察細胞的 現(xiàn)象來鑒別細胞壁是否再生。

（4）由于導入的目的基因能轉錄出反義RNA，且能與 （“①天然的PG基因/②天然的PG基因轉錄的mRNA”填序號）互補結合，因此可抑制PG基因的正常表達。若觀察到番茄果實的保質期__________，則可確定轉基因番茄培育成功。

（5）將轉入反向鏈接PG基因的番茄細胞培育成完整的植株，還需要用 技術；其中，愈傷組織經(jīng)__________形成完整植株。

Answer 1

【答案】（1）基因表達載體 限制酶和DNA連接酶 反轉錄法

（2）大量復 制目的基因（或克隆目 的基因） PCR

（3）纖維素酶和果膠酶 卡那霉素 是否發(fā)生質壁分離

（4）② 延長

（5）植物組織培養(yǎng) 再分化（或細胞增殖和分化）

【解析】

試題分析：（1）基因表達載體的構建是基因工程的核心，形成的PG反義質粒叫做基因表達載，需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。已獲取PG的mRNA，可通過逆轉法獲得目的基因。

（2）重組質粒轉化大腸桿菌的目的是讓目的基因大量復制．要實現(xiàn)此目的可以用PCR擴增。

（3）要獲取番茄的原生質體可以纖維素酶和果膠酶進行酶解。 由圖可知質粒上含有卡那霉素抗性基因，所以含重組質粒的農(nóng)桿菌感染番茄原生質體后將會使原生質體獲得抗卡那霉素的能力，因此可用含卡那霉素的培養(yǎng)基進行篩選；植物細胞在質量分數(shù)為0．3g/ml的蔗糖溶液中會發(fā)生質壁分離現(xiàn)象，所以可以用來鑒別細胞壁是否再生。

（4）由以上分析可知，反義RNA和與天然PG基因轉錄的mRNA結合，從而抑制翻譯過程；若轉基因番茄的保質期比非轉基因番茄長，則可確定轉基因番茄成功。

（5）將轉入反向鏈接PG基因的番茄細胞培育成完整的植株，還需要用植物組織培養(yǎng)技術，愈傷組織經(jīng)再分化形成完整植株。