Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

請(qǐng)回答：

(1)步驟①中，核移植技術(shù)需要把供體細(xì)胞核和去除______的MⅡ中期卵母細(xì)胞構(gòu)建成重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)再發(fā)育成重組胚胎。

(2)ES細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）來源于早期胚胎和____，它在形態(tài)上的特性是____；在功能上的特性是_____。

(3)步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體。獲取目的基因時(shí)，可以利用___技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段，該技術(shù)的前提是根據(jù)Rag2基因的______設(shè)計(jì)引物。

若果要用HindⅢ和Pst I限制酶分別在含Rag2基因的DNA片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段，為將該片段和載體連接，所選擇的載體上也應(yīng)具有的酶切位點(diǎn)的限制酶種類是_____。

(4)為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞中的________，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】細(xì)胞核 原始性腺 體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯 具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞 PCR 核苷酸序列 Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶 蛋白質(zhì)

【解析】

本題中涉及到細(xì)胞核移植和基因工程和干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)手段，通過圖中方法進(jìn)行基因治療小鼠沒有免疫排斥現(xiàn)象。

（1）細(xì)胞核移植的過程是將體細(xì)胞核移植到去細(xì)胞核的發(fā)育到MⅡ中期卵母細(xì)胞中。
（2）胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上的特性是體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯 ，功能上的特性是具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞 。

（3）擴(kuò)增目的基因用PCR技術(shù)可以短時(shí)間內(nèi)獲得大量目的基因，在擴(kuò)增前需要提前根據(jù)已知的Rag2基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物。為了使目的基因和載體能連接，目的基因和載體需要用相同的限制酶切割，切出相同的黏性末端便于連接，Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，因此選擇的載體上也應(yīng)具有的酶切位點(diǎn)的限制酶種類是Hind Ⅲ和PstⅠ限制酶。

（4）檢測(cè)基因是否表達(dá)用抗原-抗體雜交法，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。