Question

【題目】植物細胞壁中存在大量不能被豬消化的多聚糖類物質，如半纖維素多聚糖、果膠質（富含有半乳 糖醛酸的多聚糖）等。研究人員通過基因工程、胚胎工程等技術培育出轉多聚糖酶基因（manA）豬，主要流程如下 圖（neo 為新霉素抗性基因）。

（1）將該重組質粒成功導入受體細胞后，經培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)約有 50%的細胞能正常表達目的基因產物，原因 是_____________________________________________________________。通過①過程獲得的重組質粒含有 4.9 kb 個堿基對，其中 manA 基因含有 1.8 kb 個堿基對。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ聯(lián)合酶切割其中一種重組質粒，只能獲得 1.7 kb 和 3.2 kb 兩種 DNA 片段，若用上述聯(lián)合酶切割同等長度的另一種重組質粒，則可獲得__________kb 長度兩種的 DNA 片段。

（2）圖 2 中，豬胎兒成纖維細胞一般選擇傳代培養(yǎng) 10 代以內的細胞，原因是__________________________________，豬 的卵母細胞一般要培養(yǎng)到__________期。

（3）在④過程的早期胚胎培養(yǎng)時，通常需要定期更換培養(yǎng)液，目的是______________________________________________，一 般培養(yǎng)到__________階段，可向受體移植。

（4）⑤過程前，通常需對受體母豬注射孕激素，對其進行__________處理。

Answer 1

【答案】目的基因與質粒結合時，存在正接和反接兩種重組質粒 3.5和1.4 保持正常的二倍體核型 減數(shù)第二次分裂中 清除代謝廢物，補充營養(yǎng)物質 桑椹胚或囊胚 同期發(fā)情

【解析】

分析題圖：①為基因表達載體的構建、②為將目的基因導入受體細胞、③為體細胞核移植、④為早期胚胎培養(yǎng)、⑤為胚胎移植。

（1）將該重組質粒成功導入受體細胞后，經培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)約有50%的細胞能正常表達目的基因產物，原因是目的基因與質粒結合時，存在正接和反接兩種重組質粒。上述4.9kb的重組質粒有兩種形式，若用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切其中一種，只能獲得1.7kb和3.2kb兩種DNA片段，說明右側BamHI和EcoRI之間的長度為1.7；用聯(lián)合酶切同等長度的另一種重組質粒，則切割的是BamHI左側的位點，又因為manA基因含有1.8kb個堿基對，可獲得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb兩種DNA片段。

（2）豬胎兒成纖維細胞一般選擇傳代培養(yǎng)10代以內的細胞，原因是保持正常的二倍體核型。細胞在傳至10～50代時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發(fā)生變化。在核移植時采集的卵母細胞，在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才進行去核操作。

（3）在早期胚胎培養(yǎng)過程中，應定期更換培養(yǎng)液，清除代謝廢物，補充營養(yǎng)物質。胚胎一般培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段，可向受體移植。

（4）胚胎移植前，通常需對受體母豬注射孕激素，使其能同期發(fā)情。