Question

【題目】某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題。

（1）在構建重組質粒時，應選用_______和________兩種限制酶對_______進行切割，然后進行連接，以保證重組DNA序列的唯一性。

（2）為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養(yǎng)基中加__________，理由是_____________。

（3）將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用_____技術，即通過_____和________兩個主要過程最終形成完整植株。

Answer 1

【答案】 SalⅠ Hind Ⅲ 質粒和抗鹽基因的DNA 氨芐青霉素 重組質粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞 植物組織培養(yǎng) 脫分化 再分化

【解析】試題分析：識記和理解基因工程的基本工具及基因工程的基本操作步驟的相關知識，并形成知識網絡，在此基礎上，通過提取圖中“三種限制酶的位置等信息”并結合題意進行相關試題的解答。

(1)題圖顯示：SalⅠ、BamHⅠ和HindⅢ這三種限制酶的酶切位點都位于質粒中的抗四環(huán)素基因上，用其中任何一種酶切割都會破壞四環(huán)素抗性基因；SalⅠ和HindⅢ的酶切位點分別位于目的基因（抗鹽基因）的兩端，而BamHⅠ的酶切位點位于目的基因中，若用BamHI酶進行酶切，會破壞目的基因的結構，最終得不到轉基因抗鹽煙草。綜上分析，在構建重組質粒時，應選用選用SalⅠ和HindⅢ對質粒和含抗鹽基因的DNA進行切割。

(2) SalⅠ和HindⅢ的酶切位點在抗四環(huán)素基因中，所構建的重組質粒中含有的抗氨芐青霉素基因結構完好，而抗四環(huán)素基因被破壞，所以為篩選出導入了重組質粒的農桿菌，應在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素。

(3) 采用植物組織培養(yǎng)技術可將轉入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)過程中，主要經過脫分化和再分化形成完整植株。