Question

【題目】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力，將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。請(qǐng)回答：

（1）采用PCR技術(shù)可擴(kuò)增干擾素基因。該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、ATP、________和酶。PCR技術(shù)采用_______方法打開DNA雙鏈。

（2）在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，能以干擾素基因產(chǎn)生的mRNA作為模板按照________原則獲得cDNA片段。

（3）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用________酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

（4）基因工程常用質(zhì)粒作為運(yùn)載體，理由是_________________（寫出3點(diǎn)）。

（5）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最常用的方法是_________。此方法的受體細(xì)胞多是_________。

Answer 1

【答案】對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì) 加熱到90-95℃ 堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 有多個(gè)限制酶切位點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存并復(fù)制、有標(biāo)記基因 顯微注射技術(shù) 受精卵

【解析】

1、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。

2、基因工程中最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

3、將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)，此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。

（1）利用PCR技術(shù)可擴(kuò)增干擾素基因需要有模板DNA、四種脫氧核苷酸、對(duì)干擾素基因特異性的DNA引物對(duì)、熱穩(wěn)定DNA聚合酶,ATP；PCR通過加熱到90-95℃將DNA雙鏈解旋。

（2）逆轉(zhuǎn)錄作用是以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則獲得cDNA分子。

（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要用胰蛋白酶時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

（4）質(zhì)粒作為運(yùn)載體的條件：質(zhì)粒具有能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存并復(fù)制、具有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、具有標(biāo)記基因等特點(diǎn)。

（5）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最常用的方法是顯微注射技術(shù)；多選擇動(dòng)物受精卵作為受體細(xì)胞。