Question

（15分）回答有關(guān)基因工程的問題：

（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生 末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生 （相同，不同）粘性末端的限制酶。

（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是 。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用 處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入：為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為 。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成 _，常用抗原-抗體雜交技術(shù)。

（3）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的 _中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的 _上。

Answer 1

(除標(biāo)注外，每空2分，共15分)

（1）平 相同（1分）

（2）提供RNA聚合酶特異性識別結(jié)合位點，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄 Ca2+ DNA—RNA分子雜交 胰島素原（蛋白質(zhì)）

（3） T—DNA 染色體

【解析】

試題分析：（1）限制酶切割DNA后，其結(jié)果可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生平末端。DNA連接酶是將具有相同粘性末端的DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵，所以若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生相同粘性末端的限制酶。

（2）啟動子位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)，所以啟動子的作用是提供RNA聚合酶特異性識別結(jié)合位點，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用Ca2+處理大腸桿菌。檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可采用DNA—RNA分子雜交技術(shù)。胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的翻譯產(chǎn)物是胰島素原（蛋白質(zhì)）。

（3）采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T—DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞中的染色體DNA上。

考點：本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生能理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。