Question

【題目】2020年初，武漢出現(xiàn)了不明原因的肺炎，經(jīng)檢測(cè)是由一種新型冠狀病毒（NCP）引起的�？蒲腥藛T正在加緊研制生產(chǎn)NCP的疫苗和探索相應(yīng)抗體的制備�；卮鹩嘘P(guān)的問(wèn)題：

（1）科研人員提出用康復(fù)者血清治療新冠型肺炎，是因?yàn)榭祻?fù)者血清中存在_______（填“抗原”或“抗體”），但該方法存在缺陷，如_______________（答出一點(diǎn)即可）。

（2）針對(duì)血清治療存在的缺陷，研究者從治愈患者捐獻(xiàn)的血液中提取漿細(xì)胞，然后用_______誘導(dǎo)該細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合。幾經(jīng)努力，最終生產(chǎn)出單克隆抗體，此種方法生產(chǎn)的抗體具有______________________的優(yōu)點(diǎn)。

（3）科研人員還設(shè)想將控制無(wú)限增殖的基因（記作X基因）轉(zhuǎn)入人的漿細(xì)胞，構(gòu)建出產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞系。用PCR技術(shù)擴(kuò)增X基因的前提是需要知道______。若在漿細(xì)胞中的染色體DNA上檢測(cè)到X基因，但該漿細(xì)胞死亡或不能增殖，則原因最可能是_______________________。

Answer 1

【答案】抗體 血清成分復(fù)雜，對(duì)于是否會(huì)引起其他問(wèn)題還存在不確定性

角度二：需要的血清數(shù)量比較大（血清抗體含量少）

角度三：血清抗體純度低，特異性差 滅活的病毒（聚乙二醇、PEG、離心、電激、振動(dòng)等均可） 特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可大量制備 X基因的（一段）核苷酸序列 X基因的插入破壞了漿細(xì)胞生命活動(dòng)必需的某些基因角度二：X基因沒(méi)有表達(dá)，所以不增殖

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）康復(fù)者的血清中含有抗新型冠狀病毒的抗體，因此有科研人員建議用康復(fù)者的血清來(lái)治療患者，但存在血清成分復(fù)雜，對(duì)于是否會(huì)引起其他問(wèn)題還存在不確定性或需要的血清數(shù)量比較大或血清抗體純度低，特異性差等問(wèn)題，該方法還存在一定的缺陷。

（2）可以采用滅活的病毒或利用聚乙二醇等誘導(dǎo)將漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。單克隆抗體與普通血清抗體相比較，最主要的優(yōu)點(diǎn)在于它的特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備。

（3）若用PCR技術(shù)擴(kuò)增X基因，則需要用到熱穩(wěn)定DNA聚合酶，該方法能夠成功獲取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，以便于擴(kuò)增X基因。若X基因的插入破壞了漿細(xì)胞生命活動(dòng)必需的某些基因，或者X基因?qū)�入漿細(xì)胞后沒(méi)有表達(dá)，都可能導(dǎo)致在漿細(xì)胞中的染色體DNA上檢測(cè)到X基因，但該漿細(xì)胞死亡或不能增殖等現(xiàn)象。