Question

【生物--現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】
某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam HI三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉索基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題．

（l）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用

 

兩種限制酶對(duì)

 

進(jìn)行切割，然后進(jìn)行連接，以保證重組DNA序列的唯一性．
（2）為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加

 

，理由是

 

．
（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用

 

技術(shù)，即通過(guò)

 

和

 

兩個(gè)主要過(guò)程最終形成完整植株，此過(guò)程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),植物培養(yǎng)的條件及過(guò)程

專(zhuān)題：

分析：分析題圖：質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)．
在質(zhì)粒上，這三種限制酶的切割位點(diǎn)都位于抗四環(huán)素基因上，用其任何一種酶都會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因；在含抗鹽基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會(huì)破壞目的基因．

解答： 解：（1）BamHI的酶切位點(diǎn)在目的基因（抗鹽基因）中，若用此限制酶，會(huì)破壞目的基因的結(jié)構(gòu)，最終得不到轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草，所以選用SalⅠ和HindⅢ對(duì)質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割．
（2）由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位點(diǎn)在抗四環(huán)素基因中．在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，抗四環(huán)素基因結(jié)構(gòu)遭到破壞，故只能在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素來(lái)篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌．
（3）采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可將植物細(xì)胞培育成完整的植株．植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，主要經(jīng)過(guò)脫分化和再分化形成完整植株，此過(guò)程須向培養(yǎng)基中加入植物激素（如生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）．
故答案為：
（l）SalⅠ和HindⅢ質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA
（2）氨芐青霉素  重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞
（3）植物組織培養(yǎng)  脫分化  再分化  植物激素（植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合題圖考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，特別是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，要求考生明確該步驟需要限制酶和DNA連接酶，至于需要哪種或哪幾種限制酶，需要考生分析題圖，選擇的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和質(zhì)粒，但不能破壞目的基因；考生要明確植物基因工程需要借助于植物組織培養(yǎng)技術(shù)，并且能夠識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過(guò)程和條件．