Question

【題目】內皮素（ET）是一種多肽，它有促進血管收縮和平滑肌細胞增殖等作用。內皮素主要通過與靶細胞膜上的內皮素受體（ETA）結合而發(fā)揮生理效應�？蒲腥藛T通過構建基因的表達載體，實現ETA基因在細胞中高效表達，其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG）。請分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是___________；過程①的最后階段要將反應體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和________鏈分開。

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_________鍵斷開，形成目的基因的黏性末端是_____________（選填“TCGA-”或“-TCGA”）。用______種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上或防止目的基因和質粒自身環(huán)化。

（3）過程⑥是否成功導入，可將大腸桿菌培養(yǎng)在含有_____________的培養(yǎng)基中進行篩選。

（4）內皮素能刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，這是因為ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上________的結合，抑制了黑色素細胞的增殖和黑色素的形成。

Answer 1

【答案】逆轉錄酶（反轉錄酶） cDNA（DNA、脫氧核苷酸） 磷酸二酯 TCGA-（或-AGCT） 兩（2、不同） 氨芐青霉素 特異性受體（受體、內皮素受體）

【解析】

基因工程又稱基因拼接技術或DNA重組技術，是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同來源的基因按預先設計的藍圖，在體外構建雜種DNA分子，然后導入活細胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產新產品。

基因工程的操作步驟：1.提取目的基因；2.目的基因與運載體結合；3. 將目的基因導入受體細胞；4.目的基因的檢測和表達。

（1）過程①根據mRNA合成cDNA，為逆轉錄的過程，需要逆轉錄酶的催化。過程①的最后階段要將反應體系的溫度升高到95℃，其目的是破壞堿基之間形成的氫鍵，使RNA鏈和cDNA鏈分開。

（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，得到粘性末端，根據限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，可以看出粘性末端為TCGA-或-AGCT。用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上或防止目的基因和質粒自身環(huán)化。

（3）可以看出基因表達載體中的標記基因為抗氨芐青霉素基因，確定是否導入成功可以直接用氨芐青霉素進行檢測。

（4）ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上受體的結合，可以減弱內皮素的作用，降低細胞中黑色素的形成，起到美白的作用。