Question

玉米的光合效率較水稻的高，這與玉米中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）有很大的關(guān)系．如何將玉米的這一種酶轉(zhuǎn)移到水稻等植物上一直是植物生物學(xué)家的研究課題之一．但實(shí)踐證明，常規(guī)雜交育種手段很難如愿以?xún)敚�最近，有人利用土壤農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將完整的玉米PEPC基因?qū)�入到了水稻的基因組中，為快速改良水稻的光合作用效率，提高糧食作物產(chǎn)量開(kāi)辟了新途徑．
（1）獲得PEPC基因后，將其導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒中，獲得重組質(zhì)粒需要的工具酶是

 

，請(qǐng)?jiān)谙驴蛑醒a(bǔ)充某DNA片段并畫(huà)出切割形成黏性末端的過(guò)程示意圖．

（2）導(dǎo)入完成后得到的土壤農(nóng)桿菌，實(shí)際上只有少數(shù)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，可根據(jù)質(zhì)粒中含有的

 

篩選出成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌．
（3）用含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌感染水稻細(xì)胞，即使感染成功，PEPC基因通過(guò)一定途徑整合到水稻的基因組中，但不一定會(huì)表達(dá)，原因最可能是

 

．（單選）
A．玉米和水稻不共用一套密碼子
B．水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸
C．PEPC基因受到水稻基因組中相鄰基因的影響
D．整合到水稻基因組中的PEPC基因被水稻的某種酶破壞了
（4）PEPC基因在水稻細(xì)胞中成功表達(dá)的標(biāo)志是

 

．
（5）得到PEPC基因成功表達(dá)的水稻細(xì)胞后，科研人員常采用

 

技術(shù)手段獲得轉(zhuǎn)基因水稻植株．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專(zhuān)題：

分析：基因工程的三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定．

解答： 解：（1）基因工程中使用到的酶為限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則補(bǔ)充DNA片段，在根據(jù)限制酶的特點(diǎn)畫(huà)出粘性末端．

（2）標(biāo)記基因存在的作用便于篩選含目的基因的受體細(xì)胞．
（3）凡是影響轉(zhuǎn)錄或翻譯的因素都可能會(huì)影響PEPC基因的表達(dá)．影響其表達(dá)的原因有：水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸、PEPC基因受到水稻基因組中相鄰基因的影響、整合到水稻基因組中的PEPC基因被水稻的某種酶破壞了．所有生物都共用一套密碼子，排除A；參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸大約有20種，缺乏合成PEPC的氨基酸可能性有但比較小，排除B；PEPC基因在水稻細(xì)胞中以前沒(méi)有，所以水稻細(xì)胞中存在破壞它的酶可能有，但可能性也不大，排除D；可能性最大的就是受到水稻基因組中相鄰基因的影響，故選C．
（4）PEPC基因在水稻細(xì)胞中成功表達(dá)的標(biāo)志是在水稻細(xì)胞中合成磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶．
（5）由細(xì)胞得到完整植株，要利用細(xì)胞的全能性，所以應(yīng)該用組織培養(yǎng)的方法．
故答案為：
（1）限制酶、DNA連接酶

（2）標(biāo)記基因
（3）C
（4）在水稻細(xì)胞中合成PEPC
（5）組織培養(yǎng)

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的工具及步驟，理解基因工程的步驟及使用的工具是解決此題的關(guān)鍵，難度不大．