Question

【題目】Graves病（GD）可導致甲狀腺功能亢進。研究發(fā)現(xiàn)，GD患者甲狀腺細胞表面表達大量細胞間粘附分子I（ICAM-1），導致甲狀腺腫大。科研人員通過制備單克隆抗體，對治療GD進行了嘗試。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入______________以檢測這些小鼠產生的抗體。依據(jù)反應結果，選出_______________反應最強的培養(yǎng)孔所對應的小鼠M．

（2）實驗所用骨髓瘤細胞需置于______________的氣體環(huán)境中進行培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細胞置于選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后培養(yǎng)基中_______________填（“有”或“無”）骨髓瘤細胞生長，說明培養(yǎng)基符合實驗要求。

（3）從小鼠M的脾臟中取相應細胞制備成細胞懸液，與實驗用骨髓瘤細胞進行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有______________能力的細胞。將獲得的上述細胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)、檢測，篩選出符合要求的雜交瘤細胞，植入小鼠腹腔中進行克隆培養(yǎng)，一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體，其與常規(guī)的血清抗體相比，優(yōu)越性體現(xiàn)在______________。

（4）若進一步比較實驗用抗體和131I對GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請補充下表中的實驗設計__________。

對照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0．1 ml無菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1 ml無菌生理鹽水131I	___________________________

Answer 1

【答案】ICAM-1 陽性（或“抗原一抗體”） 95%空氣+5% CO2 無 無限增殖（或既能無限增殖又能產生抗體） 特異性強、靈敏度高、可大量制備 給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1 mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

【解析】

1、單克隆抗體：由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產生出的化學性質單一、特異性強的抗體.具有特異性強、靈敏度高，并可能大量制備的特點。

2、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內，使其發(fā)生免疫，小鼠體內產生具有免疫能力的B淋巴細胞。利用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），不需要A、B、AA、BB型細胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產生特定抗體的雜交瘤細胞。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測這些小鼠產生的抗體。依據(jù)反應結果，選出陽性（或“抗原-抗體”）反應最強的培養(yǎng)孔所對應的小鼠M。

（2）實驗用骨髓瘤細胞置于95%空氣+5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后培養(yǎng)基中無骨髓瘤細胞生長，說明培養(yǎng)基符合實驗要求。

（3）取小鼠M的脾臟細胞制備成細胞懸液，與實驗用骨髓瘤細胞進行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有無限增殖能力的細胞。與常規(guī)的血清抗體相比，單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高、可大量制備等特點。

（4）根據(jù)題干中實驗目的“比較實驗用抗體和1311對GD模型小鼠的治療作用”，單克隆抗體治療組（C）中應給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體。