Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題：

（1）制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。為了獲得優(yōu)良的乳酸菌菌種，分離前將泡菜汁用_________稀釋后制成較稀濃度的懸液，這樣做的目的是在培養(yǎng)時有利于獲得_____。

（2）在MRS 乳酸菌專用培養(yǎng)基（含CaCO3）上會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。

菌種	菌落直徑：C(mm)	透明圈直徑：H（mm）	H/C
I	5.1	11.2	2.2
II	8.1	13.0	1.6

有關(guān)本實(shí)驗(yàn)的敘述，錯誤的是_____。

A. 應(yīng)選擇細(xì)菌I 進(jìn)一步純化 B.篩選乳酸菌時，菌液應(yīng)稀釋后劃線

C.以上兩種細(xì)菌均能將乳酸分泌至細(xì)胞外 D.H/C 值反映了兩種細(xì)菌產(chǎn)生乳酸能力的差異

（3）泡菜腌制過程中會產(chǎn)生對人體有害的亞硝酸鹽，為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取濾液，加入氫氧化鈉和硫酸鋅溶液產(chǎn)生白色沉淀，經(jīng)_____后過濾備用。

（4）亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與_________偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后將樣品液用光程為 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下測定光密度值。若所測得的光密度值過大應(yīng)采取的措施是_____或者_____。

（二）利用基因編輯技術(shù)將病毒外殼蛋白基因?qū)�入豬細(xì)胞中，然后通過核移植技術(shù)培育基因編輯豬， 可用于生產(chǎn)基因工程疫苗。下圖為基因編輯豬培育流程，請回答下列問題：

（1）對 1 號豬使用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，用_____定位取卵。

（2）采集 2 號豬的組織塊，用胰蛋白酶處理獲得分散的成纖維細(xì)胞，放置于 37℃的 CO2 培養(yǎng)箱中進(jìn)行_________培養(yǎng)，其中 CO2 的作用是_____。

（3）為提高重組卵發(fā)育的成功率，實(shí)驗(yàn)過程中可采取的措施有： ①在核移植前對成纖維細(xì)胞進(jìn)行_____培養(yǎng)處理； ②采用了_____技術(shù)刺激重組卵。

（4） 在 進(jìn) 行 基 因 編 輯 操 作 時 ， 需 要 用 到 的 工 具 酶 有_____________。

（5）為檢測病毒外殼蛋白基因是否在 4 號豬體內(nèi)正常表達(dá)，可采用的方法是__________ 。

Answer 1

【答案】無菌水（或無菌蒸餾水） 單菌落 B 60℃水浴加熱（或水浴加熱、60℃水�。� N-1-萘基乙二胺 用蒸餾水稀釋樣品液 采用光程較小的比色杯 超聲監(jiān)視器（或B超） 液體懸�。ɑ驊腋　⒄駬u、振蕩） 維持培養(yǎng)液的pH 營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)血清濃度） 電脈沖（或電脈沖細(xì)胞融合或胚激活） 限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 抗原-抗體雜交

【解析】

泡菜制作的原理：泡菜的制作離不開乳酸菌。在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸，測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

核移植過程：

（一）（1）為了獲得優(yōu)良的乳酸菌菌種，分離前將泡菜汁用無菌水（或無菌蒸餾水）稀釋后制成較稀濃度的懸液，這樣做的目的是在培養(yǎng)時有利于獲得單菌落。

（2）A. 據(jù)圖分析，菌種Ⅰ分解淀粉的能力更強(qiáng)，應(yīng)選擇細(xì)菌I 進(jìn)一步純化，A正確；

B. 圖示接種方法為稀釋涂布平板法，篩選分離淀粉分解菌時需要將菌液進(jìn)行一定程度的稀釋才能涂布培養(yǎng)，B錯誤；

C. 據(jù)圖分析可知，兩個菌落均產(chǎn)生了透明圈，說明兩種細(xì)菌均能將淀粉酶分泌至細(xì)胞外，C正確；

D. 據(jù)表分析可知，H/C值越大，分解淀粉能力越強(qiáng)，該值的大小反映了兩種細(xì)菌分解淀粉能力的差異，D正確。

故選B。

（3）為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取濾液，加入氫氧化鈉和硫酸鋅溶液產(chǎn)生白色沉淀，經(jīng)60℃水浴加熱后過濾備用。

（4）亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后將樣品液用光程為 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下測定光密度值。若所測得的光密度值過大時，應(yīng)用蒸餾水稀釋樣品液或者采用光程較小的比色杯。

（二）（1）對供體母豬使用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，用超聲監(jiān)視器定位取卵。

（2）采集2號豬的組織塊，用胰蛋白酶處理獲得分散的成纖維細(xì)胞，放置于 37℃的 CO2 培養(yǎng)箱中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，其中 CO2 的作用是維持培養(yǎng)液的pH。

（3）為提高重組卵發(fā)育的成功率，在核移植前對成纖維細(xì)胞進(jìn)行營養(yǎng)限制性培養(yǎng)處理或采用電脈沖技術(shù)刺激重組卵。

（4）在進(jìn)行基因編輯操作時，需要用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。

（5）為檢測病毒外殼蛋白基因是否正常表達(dá)，可采用的方法是抗原-抗體雜交。