Question

【題目】為實現目的基因與運載體結合，以便在大腸桿菌中大量表達相應的蛋白質，研究人員進行了如圖所示操作．請分析回答下列問題：

（1）圖表示用Bam H I切割含目的基因的_____________，質粒經相同限制酶處理后，經_____________酶的作用獲得a，a稱作_____________．將a與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有________的培養(yǎng)基上．質粒中抗氨芐青霉素基因稱為_____________，在篩選過程起作用．若要證明培養(yǎng)基是否符合實驗要求，培養(yǎng)基上需接種_____________的感受態(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現菌落則培養(yǎng)基合格。

（2）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過_____________相連，已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構建a的過程中用該酶處理質粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是__________________________． 如果要檢測目的基因 是否成功表達，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌的______________ ， 用相應_____________________檢測。

Answer 1

【答案】DNA片段 DNA連接酶 基因表達載體（重組質粒） 氨芐青霉素 標記基因 未經質�；旌� 磷酸二酯鍵 防止質粒自我連接 總蛋白 抗體

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）圖表示用BamHI為限制性內切酶，能識別特定的堿基序列，切割含目的基因的DNA片段，質粒經相同限制酶處理后，形成的黏性末端相同，經DNA連接酶酶的作用獲得基因表達載體，也叫重組質粒．由于質粒中含有標記基因抗氨芐青霉素基因，故將重組質粒與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上。在篩選過程，導入重組質粒的大腸桿菌能正常生活，而未導入重組質粒的大腸桿菌則不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生活。若要證明培養(yǎng)基是否符合實驗要求，需設置對照試驗，即培養(yǎng)基上需接種未經質�；旌系母惺軕B(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現菌落則培養(yǎng)基合格。

（2）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過磷酸二酯鍵相連；構建a的過程中用堿性磷酸酶處理質粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是使它們形成的黏性末端不同，防止質粒自我連接。檢測目的基因是否成功表達，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌的總蛋白，通過抗原抗體雜交試驗，用相應抗體檢測。