Question

3．如圖是分離、純化及保存枯草芽孢桿菌菌株的過程示意圖：將土壤表層土稀釋液煮沸十五分鐘（枯草芽孢桿菌的芽孢不會失去活性）靜置5分鐘后獲得樣品，進行如圖操作：

請回答下列問題：
（1）題中煮沸對目的菌種起到選擇（除去其它不產(chǎn)生芽孢的雜菌）作用．
（2）圖中進行劃線操作前須用灼燒滅菌（灼燒）法對接種環(huán)進行滅菌．對于使用頻繁的菌種可接種到圖中的固體斜面 培養(yǎng)基中臨時保藏，對于需要長期保存的菌種可用甘油管藏法．
（3）用稀釋涂布平板法在5個培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為13、160、532、175和187．每ml樣品中的細(xì)菌數(shù)量為1.74×10⁷ 個；
（4）用（3）所述方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實際數(shù)目少，原因是兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）根據(jù)題意可知，枯草芽孢桿菌的芽孢在高溫下不會失去活性，因此除用選擇培養(yǎng)基外，還有煮沸操作起到篩選作用．
（2）圖中進行劃線操作前須用灼燒滅菌（灼燒）法對接種環(huán)進行滅菌．對于使用頻繁的菌種可接種到圖中的固體斜面  培養(yǎng)基中臨時保藏，對于需要長期保存的菌種可用甘油管藏法．
（3）用稀釋涂布平板法在5個培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為13，160，532，175和187．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，因此每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)量為=$\frac{160+175+187}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×10⁴=1.74×10⁷個．
（4）由于兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此用上述方法統(tǒng)計出的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實際數(shù)目少．
故答案為：
（1）選擇（除去其它不產(chǎn)生芽孢的雜菌）
（2）灼燒滅菌（灼燒）      固體斜面       甘油管藏
（3）1.74
（4）少    兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)；識記計數(shù)微生物常用的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．