Question

20．病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移是現(xiàn)在基因治療研究的最新方向，美、法等國(guó)成功采用腺病毒載體進(jìn)行心、腦、肺、肝內(nèi)膽管和肌肉組織的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移．其具體思路如下：

回答下列問(wèn)題：
（1）如果要在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術(shù)，這個(gè)過(guò)程需要2種引物．在操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是使引物結(jié)合到互補(bǔ)的DNA鏈上．
（2）作為接受轉(zhuǎn)移基因的體細(xì)胞應(yīng)具有的特點(diǎn)是應(yīng)具有增殖優(yōu)勢(shì)．在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要的培養(yǎng)條件是無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、溫度和PH、氣體環(huán)境．
（3）如果檢測(cè)發(fā)現(xiàn)目的基因被成功導(dǎo)入了受體細(xì)胞，但卻沒(méi)有檢測(cè)到目的基因相對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)，應(yīng)考慮位于目的基因首端的啟動(dòng)子和末端的終止子是否設(shè)計(jì)好，并從這方面進(jìn)一步改善．
（4）胚胎干細(xì)胞也可以作為基因治療的受體細(xì)胞，ES在功能上具有發(fā)育的全能性，ES細(xì)胞研究體外細(xì)胞分化時(shí)，在飼養(yǎng)層細(xì)胞上可以維持不分化狀態(tài)．
（5）某些病還可以用設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)來(lái)治療，在實(shí)施體外受精-胚胎移植技術(shù)必須獲得衛(wèi)生部的批準(zhǔn)證書，而植入前需對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷．

Answer 1

分析 1、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因
（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制
（2）過(guò)程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成．
（3）條件：模板、原料、引物、耐高溫的DNA聚合酶等．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)需要一對(duì)引起，即兩種引物；PCR操作過(guò)程中：第一次升溫是使雙鏈解開，即高溫解鏈；降溫的目的是使引物和模板鏈結(jié)合，即低溫復(fù)性；第二次升溫是使DNA復(fù)制開始進(jìn)行．
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH、氣體環(huán)境．
（3）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，啟動(dòng)子位于目的基因的首端，啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，終止子位于目的基因的末端，終止轉(zhuǎn)錄過(guò)程．
（4）胚胎干細(xì)胞在功能上具有發(fā)育的全能性；研究體外細(xì)胞分化時(shí)，ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上可以維持只分裂不分化狀態(tài)．
（5）某些病還可以用設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)來(lái)治療，在實(shí)施體外受精-胚胎移植技術(shù)必須獲得衛(wèi)生部的批準(zhǔn)證書，而植入前需對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷．
故答案為：
（1）2 種   使引物結(jié)合到互補(bǔ)的DNA鏈上
（2）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、溫度和PH、氣體環(huán)境
（3）啟動(dòng)子     終止子
（4）發(fā)育的全能性     飼養(yǎng)層
（5）遺傳學(xué)診斷

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程和細(xì)胞工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠掌握基因工程的工具、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．