Question

【題目】由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（圖甲所示）。

（1）圖甲中，過程①需要的酶有___________。為達到篩選目的，平板內的固體培養(yǎng)基應以___________作為唯一碳源。②、③過程需要重復幾次，目的是___________。

（2）某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學的接種方法是___________；推測該同學接種時可能的操作失誤是___________。

（3）以淀粉為原料，用工程酵母菌在適宜條件下密閉發(fā)酵，隔一段時間需要進行排氣，其原因是_________________________________。

（4）對于實驗結果分析正確的是（________）

A．α-淀粉酶基因是否表達可通過DNA分子雜交技術來檢測

B．在培養(yǎng)基中添加碘液進行染色，菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，顏色較淺

C．在密閉和不密閉的情況下培養(yǎng)，酵母菌出現(xiàn)的透明圈大小不同

D．在實驗條件適宜時，酵母菌進行孢子生殖，繁殖迅速

Answer 1

【答案】限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶 淀粉 進一步篩選純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌 稀釋涂布平板法 涂布不均勻 酒精發(fā)酵產生CO2需要排出，否則壓力過大 BC

【解析】

分析圖甲：圖甲是將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種的過程。圖中①表示基因表達載體的構建過程；②、③過程重復幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌。

分析圖乙：圖乙是一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布，可見其采用的是稀釋涂布平板法，但圖中群落分布相對較集中。

培養(yǎng)基配制時的注意事項

①全程要求無菌操作，無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效地避免操作者自身被微生物感染。

②培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板�？梢杂檬钟|摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，當感覺到錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板。操作時應使錐形瓶的瓶口通過火焰，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

③平板冷凝后皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

④在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底之間的部位，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。

（1）圖甲中①表示基因表達載體的構建過程，該過程需要用到的工具酶有：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶；普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選出工程酵母菌；②、③過程重復幾次的目的是進一步篩選純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌。

（2）由圖乙可知，該同學采用的是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好的分散開來，可能是涂布不均勻導致的。

（3）由于酵母菌酒精發(fā)酵過程中產生CO2，需要及時排出否則壓力過大，因此在利用工程酵母菌進行密閉發(fā)酵時，每隔一段時間需要進行排氣。

（4）A、可用DNA分子雜交技術檢測目的基因是否導入受體細胞，而基因表達的產物為蛋白質，不能用DNA分子雜交技術進行檢測，A錯誤；

B、工程酵母菌可高效利用淀粉，因此若在培養(yǎng)基中添加碘液進行染色，菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，且顏色較淺，B正確；

C、酵母菌屬于兼性厭氧菌，在密閉和不密閉的情況下培養(yǎng)，消耗的淀粉量不同，因此酵母菌出現(xiàn)的透明圈大小不同，C正確；

D、在實驗條件適宜時，酵母菌可進行出芽生殖，D錯誤。

故選BC。