【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度bp即堿基對和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識別的堿基序列和酶切位點分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題

1圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由___________連接。

2若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段,其產(chǎn)物長度為______________________。

3若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段,用限制酶Sma I完全切割,產(chǎn)物中共有___________種不同長度的DNA片段。

4若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接,形成重組質(zhì)粒,那么應選用的限制酶是______________________。在導入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加______________________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

【答案】1脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖

2523bp、724bp、643bp

34

4BamH I 抗生素B

【解析】

試題分析:(1一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接。

2限制酶Sma的酶切位點是CCCGGG,其切割產(chǎn)生的是平末端圖1中DNA片段含有兩個Sma酶切位點,被Sma酶完全切割后出現(xiàn)三個長度的片段,分別是537bp、790bp、661bp。

3雜合子的基因型為Dd,其中D基因片段有兩個Sma酶切位點,完全切割后出現(xiàn)三個片段長度分別是537bp、790bp、661bp,發(fā)生基因突變后的d基因片段只有一個Sma酶切位點,完全切割后出現(xiàn)兩個片段長度分別是1327bp、661bp,所以從雜合子中分離的DNA片段被限制酶Sma完全切割后形成會四種不同的DNA片段

4基因表達載體構(gòu)建的過程中需要利用限制酶和DNA連接酶限制酶Msp和Sma的切割位點位于目的基因D上,若用這兩種酶切割會被破壞目的基因D;運載體的兩個標記基因上都有限制酶Mbo的切割位點,用該酶切割會破壞這兩個標記基因,因此只能選用限制酶BamH切割外源DNA分子和運載體用限制酶BamH切割質(zhì)粒會破壞抗生素A抗性基因,但不會破壞抗生素B抗性基因,所以導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生存,因此為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

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