Question

【題目】回答下列（一）、（二）兩個(gè)小題。

（一）脲酶是催化尿素分解的特異性水解酶。該酶主要從刀豆等豆科植物中提取，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于尿素廢水的凈化過(guò)程。請(qǐng)分析回答以下問(wèn)題：

(1)脲酶可以催化尿素分解為________，其中堿性物質(zhì)可以能使_______指示劑變?yōu)?/span>________。

(2)為了提高脲酶的利用效率，可以采用固定化酶技術(shù)將其固定。酶的固定化方法有：吸附法、交聯(lián)法、包埋法和________。

(3)實(shí)驗(yàn)室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過(guò)柱前，先用__________，目的是除去未吸附的游離脲酶。

(4)脲酶除了從植物獲取外，還可以來(lái)源于土壤中的微生物。為了從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物，采用的分離方法操作最簡(jiǎn)便的是____________。下列有關(guān)該分離方法操作的敘述，錯(cuò)誤的是________。

A．必須使用固體培養(yǎng)基

B．必須在酒精燈火焰旁接種

C．必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)

D．必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、土壤懸浮液等進(jìn)行滅菌處理

(二)如圖表示動(dòng)物細(xì)胞克隆和制備單克隆抗體的相關(guān)過(guò)程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)過(guò)程①常應(yīng)用________方法導(dǎo)入重組誘導(dǎo)基因后得到干細(xì)胞；部分干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可分化成全身的不同組織或器官，說(shuō)明這些細(xì)胞具有________性。

(2)該過(guò)程利用了甲細(xì)胞具有的________能力，甲和乙細(xì)胞可經(jīng)過(guò)生物誘導(dǎo)劑____________________的作用形成丙細(xì)胞。取一個(gè)丙細(xì)胞，放在含大量失去________的小鼠成纖維細(xì)胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最后產(chǎn)生大量的細(xì)胞群，這種方法為________法。

(3)下列關(guān)于經(jīng)③和④過(guò)程得到單克隆抗體的敘述，錯(cuò)誤的是 _________

A．該過(guò)程應(yīng)用了細(xì)胞膜具有流動(dòng)性的原理

B．丙細(xì)胞要具有分泌多種抗體的能力

C．該過(guò)程應(yīng)用了動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

D．丙細(xì)胞的形成先通過(guò)篩選得到雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)行抗體檢驗(yàn)

Answer 1

【答案】NH3和CO2 酚紅 紅色 共價(jià)偶聯(lián)法 10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱 劃線分離法 D 顯微注射 發(fā)育全能 連續(xù)增殖 (滅活的)仙臺(tái)病毒 增殖力 克隆培養(yǎng) B

【解析】

（一）1、選擇培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。
2、分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
3、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（二）1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
（1）充足的營(yíng)養(yǎng)供給--微量元素、無(wú)機(jī)鹽、糖類、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。
（2）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。
（3）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。
（4）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2．O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。
2、單克隆抗體的制備過(guò)程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（一）（1）脲酶可以催化尿素分解為NH3和C02，其中堿性物質(zhì)可以能使酚紅指示劑變?yōu)榧t色。

（2）酶的固定化方法有：吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、包埋法和交聯(lián)法。
（3）實(shí)驗(yàn)室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過(guò)柱前，先用10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱，目的是除去未吸附的游離脲酶。
（4）分離微生物常用稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中平板劃線法是從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物的最簡(jiǎn)便的方法．采用平板劃線法時(shí)，必須使用固體培養(yǎng)基；為了防止雜菌污染，必須在酒精燈火焰旁接種；配置培養(yǎng)基時(shí)，必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，防止皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基污染培養(yǎng)基；必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌處理，對(duì)土壤懸浮液不能進(jìn)行滅菌處理，否則會(huì)殺死目的菌。故選D。

（二）（1）由圖示可知，過(guò)程①常應(yīng)用顯微注射方法導(dǎo)入重組誘導(dǎo)基因后得到干細(xì)胞；部分干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)可分化成全身的不同組織或器官，說(shuō)明這些細(xì)胞具有發(fā)育全能性。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液 中必須通入 O2和 CO2，通入 CO2的目的是維持培養(yǎng)液的 pH。
（2）該過(guò)程利用了甲細(xì)胞具有發(fā)育全能性的能力。制備單克隆抗體過(guò)程中，甲和乙細(xì)胞可經(jīng)過(guò)生物誘導(dǎo)劑滅活的仙臺(tái)病毒的作用融合形成丙細(xì)胞。取一個(gè)丙細(xì)胞，放在含大量失去增殖力的小鼠成纖維細(xì)胞的特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最后產(chǎn)生大量的細(xì)胞群，這種方法為克隆培養(yǎng)法。
（3）該過(guò)程中，動(dòng)物細(xì)胞融合應(yīng)用了細(xì)胞膜具有流動(dòng)性的原理，A正確；丙細(xì)胞只具有分泌專一抗體的能力，B錯(cuò)誤，該過(guò)程應(yīng)用了動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，C正確；丙細(xì)胞的形成先通過(guò)篩選得到雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)行專一抗體檢驗(yàn)，D正確。即關(guān)于經(jīng)③和④過(guò)程得到單克隆抗體的敘述，錯(cuò)誤的是B。