Question

【題目】回答下列(一)、(二)小題：

(一)隨著社會(huì)的發(fā)展，石油產(chǎn)品的使用越來越多，石油烴污染也越來越嚴(yán)重。為了篩選出分解石油烴能力強(qiáng)的微生物，人們不斷地進(jìn)行研究。下圖為獲取能分離出分解石油烴的微生物的土壤樣品后的研究過程，請回答有關(guān)問題：

(1)獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在____________________。為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①④所用的選擇培養(yǎng)基只能以石油烴作為唯一碳源，其原因是________________。

(2)根據(jù)⑤平板上生長的菌落，對④進(jìn)行接種采用的方法是____________法，若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可以將圖中③取出的菌液________________。

(3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是__________。采用____________方法對其進(jìn)行滅菌。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤是______________________(寫出一點(diǎn)即可)。

(二)毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIFⅡ)基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖。

(1)獲取外源基因用到的工具酶是___________________。

(2)在過程②中，用____________酶處理將皮膚組織塊分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的技術(shù)，叫細(xì)胞克隆。未經(jīng)克隆化的細(xì)胞系具有________性。由于人們對動(dòng)物細(xì)胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入一定量的______________，在培養(yǎng)過程中應(yīng)將培養(yǎng)瓶置于___________培養(yǎng)。

(3)若要獲得多只相同的轉(zhuǎn)基因山羊，可對圖中早期胚胎進(jìn)行____________后進(jìn)行胚胎移植。

(4)下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因山羊培育過程的敘述，錯(cuò)誤的是________。

A．圖中重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞

B．重組細(xì)胞最初分裂時(shí)開始進(jìn)行DNA復(fù)制和基因的轉(zhuǎn)錄

C．將早期胚胎(如早期囊胚)植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位

D．如果KIFⅡ基因的序列是已知的，則可用化學(xué)方法合成或用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增該基因

Answer 1

【答案】 石油烴污染明顯處 只有能利用石油烴的微生物能正常生長繁殖 涂布分離 進(jìn)行（梯度）稀釋 接種環(huán) 灼燒 接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 限制性核酸內(nèi)切酶 胰蛋白酶 異質(zhì) 動(dòng)物血清 CO2培養(yǎng)箱 胚胎分割 B

【解析】試題分析：

(一）（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在石油污染明顯處。

（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。
培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學(xué)消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法。
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體--菌落。

(二）分析題圖：圖示是獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程圖，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要限制酶和DNA連接酶；②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程；③表示從成年母絨山羊中獲取卵母細(xì)胞

解析：

一、（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在石油污染明顯處，為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養(yǎng)基，其成分的特點(diǎn)是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長。

（2）常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，若發(fā)現(xiàn)無法區(qū)分菌落，說明稀釋度不夠，可以將重新進(jìn)行梯度稀釋。
（3）接種的工具為接種環(huán)；配置好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進(jìn)行。接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 ，均會(huì)導(dǎo)致 造成劃線無菌落。

二、（1）①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，其次還要用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子。
（2）②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程，該過程中要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理將皮膚組織塊，使之分散成單個(gè)成纖維細(xì)胞。未經(jīng)克隆化的細(xì)胞系具有異質(zhì)性。由于人們對動(dòng)物細(xì)胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入一定量的動(dòng)物血清，在培養(yǎng)過程中應(yīng)將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)
（3）從重組細(xì)胞到早期胚胎需要采用（早期）胚胎培養(yǎng)技術(shù)．在胚胎移植前，通過胚胎分割技術(shù)可獲得較多胚胎

（4）A.圖中重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞，A正確；

B.重組細(xì)胞最初分裂前就有基因的轉(zhuǎn)錄，B錯(cuò)誤；

C.將早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位，便于早起胚胎的著床，C正確；

D.化學(xué)方法合成或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增可用于獲取已知序列的目的基因，D正確