Question

基因工程自20世紀70年代興起后，發(fā)展迅猛，成果顯著。
Ⅰ利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是       ______。在用表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用            處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為       __________   。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用______________________技術。
Ⅱ近10年來，PCR技術（多聚酶鏈式反應）成為分子生物學實驗室的一種常規(guī)手段，下圖為PCR原理示意圖，據(jù)圖回答問題。

（1）基因工程中，利用PCR技術來________________，PCR技術依據(jù)的原理是DNA的半保留復制，生物體內(nèi)也能完成DNA的復制，但有所不同，圖中A過程稱為____________，在生物體內(nèi)需要____________才能完成。圖中B 過程的完成需要_________等條件（3分）。
（2）若DNA樣品的長度為100個堿基對，且A占15%，則完成三次循環(huán)，共需要提供的胞嘧啶脫氧核苷酸___________個。

Answer 1

Ⅰ RNA聚合酶識別和結合的部位    Ca²⁺    分子雜交技術 抗原-抗體雜交技術
Ⅱ （1）擴增目的基因  解旋（變性）  DNA解旋酶  樣品DNA的兩條鏈為模板、四種脫氧核苷酸、Taq酶（3分，答對三個得全分） （2）490

解析試題分析：
Ⅰ基因表達載體中的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，并驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程。將目的基因?qū)�入大腸桿菌時，常用Ca²⁺ 處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細胞，以利于表達載體進入；標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交稱為分子雜交技術。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原—抗體雜交技術。
Ⅱ（1）基因工程中，利用PCR技術來擴增目的基因。圖中A過程表示解旋（高溫變性），在生物體內(nèi)需要DNA解旋酶才能完成。圖中B 過程是低溫復性，需要的條件有：DNA的兩條鏈為模板、四種脫氧核苷酸、Taq酶、一對引物等。
（2）已知DNA樣品的長度為100個堿基對（200個堿基），其中A占15%，根據(jù)堿基互補配對原則，胞嘧啶=200×（50%—15%）=70，復制三次需胞嘧啶脫氧核苷酸數(shù)目=(2³-1) ×70=490個。
考點：本題考查基因工程的步驟，PCR技術和半保留復制的計算。
點評：本題有一定的綜合性，意在考查學生識記和理解能力，屬于容易題。