Question

【題目】嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫技術(shù)（簡(jiǎn)稱(chēng)CAR－T技術(shù)）是目前較為有效的治療惡性腫痛的方式之一。該技術(shù)的原理是用基因工程技術(shù)，把從患者體內(nèi)獲取的T細(xì)胞加入一個(gè)能識(shí)別癌細(xì)胞同時(shí)激活T細(xì)胞的嵌合抗體（CAR），賦子T細(xì)胞HLA非依賴的方式識(shí)別腫瘤抗原的能力�；卮鹣铝袉�(wèn)題。

（1）正常細(xì)胞發(fā)生癌變主要與_________突變相關(guān)。

（2）體外培養(yǎng)從患者體內(nèi)獲取的T細(xì)胞必須保證無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，具體措施_________（答出兩點(diǎn)即可）。

（3）該技術(shù)的關(guān)鍵是制備針對(duì)癌細(xì)胞的特異性抗體�？梢詫�癌細(xì)胞表面抗原注入小鼠體內(nèi)，從小鼠血液中分離特異性抗體。然后，分析該抗體的氨基酸序列，推導(dǎo)其應(yīng)有的_________序列，然后通過(guò)________（填儀器）合成相應(yīng)基因（CAR基因）。獲取的基因經(jīng)進(jìn)一步修飾后可利用___________（填方法）導(dǎo)入T細(xì)胞。

（4）為檢測(cè)CAR基因在T細(xì)胞內(nèi)是否正常轉(zhuǎn)錄，需要提取T細(xì)胞的總mRNA與以___________為探針進(jìn)行雜交，以篩選能夠正常轉(zhuǎn)錄的CAR－T細(xì)胞。

（5）篩選的CAR－T細(xì)胞在回輸病人體內(nèi)前，還需進(jìn)行___________檢測(cè)和體外擴(kuò)增，以確保其其有治療癌癥的效果。

Answer 1

【答案】原癌基因和抑癌基因 對(duì)培養(yǎng)液和所有用具進(jìn)行無(wú)菌處理、在培養(yǎng)液中添加一定量抗生素、定期更換培養(yǎng)液防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞造成危害等 核苷酸（或脫氧核苷酸或基因） DNA合成儀 顯微注射法 放射性同位素標(biāo)記的CAR基因 功能

【解析】

細(xì)胞癌變的內(nèi)因：原癌基因和抑癌基因發(fā)生基因突變，其中原癌基因負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的過(guò)程，抑癌基因主要是阻止細(xì)胞不正常的增殖；蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白質(zhì)工程特有的途徑；以下按照基因工程的一般步驟進(jìn)行。

（1）細(xì)胞發(fā)生癌變的原因是原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變。

（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)為營(yíng)造無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，可以通過(guò)以下措施實(shí)現(xiàn)：對(duì)培養(yǎng)液和所有用具進(jìn)行無(wú)菌處理、在培養(yǎng)液中添加一定量抗生素、定期更換培養(yǎng)液防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞造成危害等；

（3）制備特異性抗體時(shí)可以將癌細(xì)胞表面抗原注入小鼠體內(nèi)，從小鼠血液中分離特異性抗體。然后，分析該抗體的氨基酸序列，推導(dǎo)其應(yīng)有的核苷酸序列，然后通過(guò)DNA合成儀合成相應(yīng)基因（CAR基因）；將目的導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞（T細(xì)胞）的方法為顯微注射技術(shù)。

（4）為檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，需要提取T細(xì)胞的總mRNA與以放射性同位素標(biāo)記的目的基因（CAR基因）為探針進(jìn)行雜交，若出現(xiàn)雜交帶，則證明轉(zhuǎn)錄成功。

（5）為確保CAR－T細(xì)胞有治療癌癥的效果，在回輸病人體內(nèi)前需進(jìn)行功能檢測(cè)和體外擴(kuò)增。