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普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中，經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖甲所示）．

（1）圖甲中，過程①需要的酶有
 
．為達到篩選目的，平板內的固體培養(yǎng)基應加入
 
．
（2）α-淀粉酶基因必須位于重組質粒的啟動子和終止子之間的原因是
 
．
（3）除了用選擇培養(yǎng)基篩選工程菌之外，還可用DNA雜交技術直接鑒定帶有重組質粒的酵母菌．具體操作如圖乙所示，結合圖乙回答一下問題．

利用PCR技術制備DNA探針，需加入
 
才能是DNA探針具有放射性．如何根據(jù)放射性自顯影結果做出判斷
 
．
考點：基因工程的原理及技術,PCR技術的基本操作和應用
專題：
分析：據(jù)圖甲分析，①步驟為將目的基因與運載體連接形成重組質粒；并且接種到固體培養(yǎng)基上篩選出高效利用淀粉的工程酵母菌．
圖乙中首先利用影印法獲得菌落，然后將酵母菌的DNA裂解成單鏈，再利用DNA分子雜交的原理將DNA探針與單鏈DNA結合，如果發(fā)生重組，說明含有目的基因，并且能夠在膠片上呈現(xiàn)結果．
探針是用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段．
解答： 解：（1）圖甲過程①表示基因表達載體的構建，該過程先要用同種限制性核酸內切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒，再用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來形成重組質粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選出工程酵母菌．
（2）啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度．終止子是給予RNA聚合酶轉錄終止信號的DNA序列．因此目的基因必須位于重組質粒的啟動子和終止子之間，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用．
（3）根據(jù)圖乙可以看出，該技術利用DNA分子雜交技術，因此利用PCR技術制備的DNA探針需加入同位素．放射性自顯影結果表明，該處DNA探針與目的基因發(fā)生的互補配對，因此根據(jù)光學膠片上放射性自顯影的具體斑點位置，確定和挑選出克隆了目的基因的菌落．
故答案為：
（1）限制酶、DNA連接酶    淀粉
（2）使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
（3）同位素
根據(jù)光學膠片上放射自顯影的具體斑點位置，確定和挑選出克隆了目的基因的菌落
點評：本題以工程菌為素材，綜合考查基因工程的相關知識，意在考查考生的識記能力、識圖能力和理解應用能力，難度適中．考生要能夠識記基因工程的操作工具，明確啟動子和終止子的作用；識記目的基因檢測與鑒定的方法，能夠通過圖解分析明確放射性自顯影技術的原理即應用．
練習冊系列答案
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科目：高中生物 來源： 題型：

下列是關于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，其中錯誤的是（　�。�
A、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基也要滅菌
B、取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1ml，分別涂布于各組平板上
C、將實驗組和對照組平板倒置，370C恒溫培養(yǎng)24-48小時
D、確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)多的實驗組平板進行計數(shù)

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科目：高中生物 來源： 題型：

下列關于肺炎雙球菌轉化實驗的敘述中，錯誤的是（　　）
A、需對S型細菌中的物質進行提取、分離和鑒定
B、配制的培養(yǎng)基應適合肺炎雙球菌的生長和繁殖
C、轉化的有效性與R型細菌的DNA純度有密切關系
D、實驗證明了DNA是遺傳物質而蛋白質不是

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科目：高中生物 來源： 題型：

【生物-現(xiàn)代生物科技專題】
人的血清白蛋白（HAS）在臨床上需求量很大，如圖是利用奶牛乳汁生產人類血清白蛋白的圖解，根據(jù)如圖回答：

（1）在基因工程中，如果①的數(shù)量太少，常采用
 
技術擴增．在基因表達載體中，必須含有
 
，便于檢測目的基因是否導入受體細胞；目的基因的首端必須含有
 
，它是RNA聚合酶的識別和結合位點，以使目的基因得以表達．
（2）實現(xiàn)①進入②的常用方法是
 
．
（3）在⑤的
 
時期植入母牛體內最佳．欲同時培育出多頭完全相同的轉基因牛犢，可以采用
 
技術．
（4）以上過程涉及到細胞水平的現(xiàn)代生物技術有
 
．

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科目：高中生物 來源： 題型：

回答有關基因工程的相關問題
人類疾病的轉基因動物模型常用于致病機理的探討及治療藥物的篩選．利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉基因模型大鼠的流程如圖所示．
（1）上述轉基因大鼠的培育過程中用于體外受精的成熟卵細胞一般可從雌鼠的輸卵管或
 
中獲取．所用到的細胞工程技術是
 
、胚胎移植．
（2）圖中的高血壓相關基因作為
 
，質粒作為
 
，二者需用
 
切割后，再用
 
連接成重組質粒
（3）上述重組質粒導入受精卵常用的技術是
 
．
（4）子代大鼠如果檢測出相關蛋白和
 
，即明高血壓相關基因已成功表達，然后可用其建立高血壓轉基因動物模型．而轉基因大鼠之所以能夠表達出與人類相同的相關蛋白，原因是
 
．

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科目：高中生物 來源： 題型：

【選修3現(xiàn)代生物科技專題】
轉基因草莓中有能表達乙肝病毒表面抗原的基因，由此可獲得用來預防乙肝的一種新型疫苗，其培育過程如圖所示（①至④代表過程，A至C代表結構或細胞）：

（1）這種新型疫苗，在免疫學中屬于
 
，圖中可看出該疫苗的化學本質是
 
．圖中①過程用到的酶是DNA連接酶，所形成的B叫做
 
．
（2）②過程常用
 
處理農桿菌，使之成為
 
細胞，利于完成轉化過程．
（3）圖中③過程叫做脫分化，④過程叫做
 
，將葉盤培養(yǎng)成草莓幼苗的技術的原理是
 
．
（4）②過程采用最多的是農桿菌，在分子水平上，可采用
 
的方法來檢測轉基因草莓果實提取液中有無相應的抗原．
（5）乙肝病毒表面抗原基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為
 
．

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科目：高中生物 來源： 題型：

如圖表示人體內各類血細胞生成的途徑．a～f表示不同種類的細胞，①～⑥表示有關過程．

（1）造血干細胞形成各種血細胞，需要經歷細胞的
 
和
 
過程．成熟紅細胞失去全能性的原因是
 
．
（2）圖中c、d細胞成熟的場所分別是
 
和
 
．f代表的細胞名稱是
 
，需要抗原刺激才能發(fā)生的過程有
 
（填數(shù)字）．
（3）對抗原具有識別能力的免疫細胞除B細胞和T細胞外，還有
 
細胞（用圖中字母表示）．
（4）試說出漿細胞（即圖中的效應B細胞）產生的途徑：①抗原由吞噬細胞吞噬處理，再經過T細胞傳遞給B細胞，后者受到刺激后增殖分化而成；②
 
；③
 
．

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科目：高中生物 來源： 題型：

回答下列有關基因工程的問題．
（1）基因工程操作過程的實現(xiàn)至少需要三種必要的工具：限制性核酸內切酶、運載體、
 
．
（2）下列有關限制性核酸內切酶的描述，正確的是
 
（多選）．
A．從反應類型來看，限制性核酸內切酶催化的是一種水解反應
B．限制性核酸內切酶能識別DNA、切割DNA任一序列
C．限制性核酸內切酶的活性受溫度、pH的影響
D．質粒分子經限制性核酸內切酶切割后，含有2個游離的磷酸基團．
E．限制性核酸內切酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的幾率就越小
（3）與“限制性核酸內切酶”作用部位完全相同的酶是
 
．
A．逆轉錄酶       B．RNA聚合酶        C．DNA連接酶       D．解旋酶
下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點．
限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ
識別序列及
切割位點		 G↓GATCC
CCTAG↑G		 A↓AGCTT
TTCGA↑A		 G↓AATTC
CTTAA↑G		 CCC↓GGG
GGG↑CCC
（4）用限制酶HindⅢ，BamH I和二者的混合物分別降解一個4kb（1kb即1千個堿基對）大小的線性DNA分子，降解產物分別進行凝膠電泳，在電場的作用下，降解產物分開，如圖3所示：P．F．Productions后期制作．
據(jù)此分析，這兩種限制性內切酶在該DNA分子上的限制位點數(shù)目是
 
．
A．HindⅢl個，BamHI 2個      　 B．HindⅢ2個，BamHI 3個
C．HindⅢ2個，BamHI 1個     　  D．HindIII和BamHI各有2個
（5）DNA分子結構的穩(wěn)定性與氫鍵數(shù)目的多少有關．若對圖1中質粒進行改造，增加其穩(wěn)定性，表中哪種酶的酶切位點會增多？
 
．
A． BamH I     B． HindⅢC．EcoR I       D．Sma I
（6）用圖1中的質粒和圖2中的外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是
 
．
（7）與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止
 
．

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科目：高中生物 來源： 題型：

如圖（一）為某基因工程中利用的質粒筒圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，ampR為青霉素（抗生素）抗性基因，tctR為四環(huán)素（抗生素）抗性基因，P為啟動因子，T為終止子，ori為復制原點．已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點．如圖（二）為幾種酶作用于基因的位置．請回答下列問題：
（1）在基因工程中常用的工具有三種：一是用作切取目的基因的
 
酶；二是將目的基因與運載體拼接的
 
酶；三是作為運載體的質粒．
（2）將含有目的基因的DNA與經特定的酶切后的動載體（質粒）進行拼接形成重組DNA，理論上講，重組DNA可能有“
 
”、“
 
”、“
 
”三種，其中有效的（所需要的）重組DNA是
 
，因此需要對這些拼接產物進行分離提純．
（3）利用圖（一）所示的質粒拼接形成的3種拼接產物（重組DNA）與無任何抗藥性的原核宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的拼接產物（重組DNA）是
 
．
（4）有效的重組DNA成功導入受體細胞進行表達時，首先需要進行轉錄，RNA聚合酶識別和結合的位點是圖（一）中的
 
．在動物基因工程中，將重組DNA導入受體細胞的常用方法是
 
．
（5）在基因工程中，作用于圖（二）所示a位置的酶是
 
；作用于b位置的酶是
 
．

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