【題目】若要制備某種細(xì)菌的基因組文庫,需首先將其基因組DNA片段分別導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞中,某科研小組設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)流程見下圖:

回答下列問題:

(1)為制備基因組文庫,步驟①中的成分X應(yīng)為該細(xì)菌所有的________________(填“mRNA”、“DNA”或“cDNA” )。步驟②中的質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因/選用該基因的作用是____________________。

(2)限制酶Sau3AI和BamHI的識別序列和切割位點(diǎn)為、,步驟③中經(jīng)兩種不同限制酶分別切割后的片段可以連接起來,原因是____________________________。

(3)步驟⑤中應(yīng)選用對氨芐青霉素____________(填“敏感”或“不敏感”)的大腸桿菌作為受體菌,轉(zhuǎn)化前通常先用_____________處理受體菌,使其處于感受態(tài)。

(4)科研小組采用下表方案進(jìn)行轉(zhuǎn)化,并檢測轉(zhuǎn)化是否成功。

一段時(shí)間后從上述三組取樣,分別涂布到含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),觀察是否有菌落的生長。

①三組實(shí)驗(yàn)菌落較多且相差不大,說明有雜菌污染或__________________________;

②若__________________________,說明轉(zhuǎn)化成功且結(jié)果可信。

【答案】DNA 鑒別受體細(xì)胞中是否含目的基因,將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來 兩種限制酶切割以后產(chǎn)生的黏性末端相同 敏感 Ca2+ 培養(yǎng)基中的氨芐青霉素己經(jīng)失效 實(shí)驗(yàn)組和對照組B有菌落生長,對照組A沒有

【解析】

基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫,基因組文庫中包含了一種生物的全部基因,cDNA文庫中包含了一種生物的一部分基因。

1)基因組文庫中包含了一種生物的全部基因,因此步驟①中的成分X應(yīng)為該細(xì)菌所有的DNA。質(zhì)粒含有的氨芐青霉素抗性基因是標(biāo)記基因,作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。

2)觀察可知,限制酶Sau3A IBamH I的識別序列和切割位點(diǎn)雖然不同,但二者切割后得到的黏性末端相同,因此兩種不同限制酶分別切割后的片段可以連接起來。

3)為了方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌,步驟⑤中應(yīng)選用對氨芐青霉素敏感的大腸桿菌作為受體菌,轉(zhuǎn)化前通常先用Ca2+處理受體菌,使細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA的感受態(tài)生理狀態(tài)。

4)①若三組實(shí)驗(yàn)菌落較多且相差不大,說明選擇培養(yǎng)失敗,可能是雜菌污染或培養(yǎng)基中的氨芐青霉素已失效引起的結(jié)果。

②如果轉(zhuǎn)化成功,應(yīng)該是實(shí)驗(yàn)組和對照組B中的大腸桿菌細(xì)胞中含有氨芐青霉素抗性基因,對照組A細(xì)胞中沒有氨芐青霉素抗性基因,因此實(shí)驗(yàn)組和對照組B有菌落生長,對照組A沒有。

練習(xí)冊系列答案
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(1)一對裂翅果蠅交配產(chǎn)生的子代數(shù)目,是一對正常翅果蠅交配產(chǎn)生子代數(shù)目的___________;將多只裂翅和正常翅果蠅放入飼養(yǎng)瓶中,隨機(jī)交配多代,子代裂翅比例將會___________(填“升高”、降低”或“不變”)。

(2)為保存該致死基因,摩爾根的學(xué)生想出了一個(gè)巧妙的方法:用另一致死基因來“平衡”。黏膠眼基因(G)和正常眼基因(g)是位于Ⅲ號染色體上的另一對等位基因,黏膠眼純合致死,F(xiàn)有①裂翅正常眼②正常翅黏膠眼③正常翅正常眼三種果蠅品系,應(yīng)選擇品系___________(填序號)交配,在F1中選出表現(xiàn)型為裂翅黏膠眼的果蠅并相互交配,F(xiàn)2中裂翅果蠅的比例為___________(不考慮交叉互換和突變)。

(3)果蠅的腿部有斑紋對無斑紋是顯性,由性染色體上的一對等位基因控制,現(xiàn)有純合雌雄果蠅若干,欲通過雜交實(shí)驗(yàn)確定該對基因位于1區(qū)段還是2區(qū)段,請寫岀最簡便的雜交方案及預(yù)期結(jié)果。

雜交方案:_______________________________________________________。

預(yù)期結(jié)果:

①若_________________________________,則該對基因位于1區(qū)段;

②若_________________________________,則該對基因位于2區(qū)段。

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