Question

7．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是乙肝表面抗原蛋白，如圖是將乙肝表面抗原基因轉移到煙草細胞內生產乙肝疫苗的示意圖，請據圖回答：

（1）過程①表示基因表達載體的構建，為了使目的基因正常表達，其首端必須有RNA聚合酶識別和結合的部位，若限制酶切出了平末端，要選擇T₄DNA連接酶 （進行連接．
（2）目的基因通過過程②進入農桿菌細胞內，并在農桿菌細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉化
（3）將乙肝表面抗原基因導入煙草細胞的方法稱為農桿菌轉化法．
（4）將乙肝表面抗原基因導入煙草細胞后，需要進行基因的檢測與鑒定：首先檢測煙草細胞的染色體DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次檢測乙肝表面抗原基因是否轉錄處相應的mRNA；最后檢測乙肝表面抗原基因是否翻譯出乙肝抗原蛋白，檢測的方法是抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：
①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；
②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
圖示中①為基因表達載體的構建，②為目的基因的導入過程．

解答 解：（1）據圖示可知，過程①表示基因表達載體的構建，啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，RNA聚合酶與其結合后可以驅動基因的轉錄．為了使目的基因正常表達，其首端必須有RNA聚合酶識別和結合的部位，即啟動子，若限制酶切出了平末端，要選擇T₄DNA連接酶進行連接．
（2）轉化是指目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程；故目的基因通過過程②進入農桿菌細胞內，并在農桿菌細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉化 
（3）將目的基因進入植物細胞常用的方法是農桿菌轉化法，故將乙肝表面抗原基因導入煙草細胞的方法稱為農桿菌轉化法．
（4）目的基因的檢測與表達：分子水平的檢測有DNA分子雜交技術檢測目的基因存在、分子雜交技術檢測是否轉錄、抗原抗體雜交技術檢測基因是否表達，還有個體水平的檢測等；故將乙肝表面抗原基因導入煙草細胞后，需要進行基因的檢測與鑒定：首先檢測煙草細胞的染色體DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次檢測乙肝表面抗原基因是否轉錄處相應的mRNA；最后檢測乙肝表面抗原基因是否翻譯出乙肝抗原蛋白，檢測的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）基因表達載體的構建  RNA聚合酶 T₄DNA連接酶 
（2）轉化 
（3）農桿菌轉化法 
（4）煙草細胞的染色體DNA上  乙肝表面抗原基因  抗原-抗體雜交

點評 本題考查了基因工程的有關知識，要求考生掌握基因工程中目的基因檢測與鑒定的方法，能夠根據題意判斷個步驟的名稱和操作，難度中等．